液体培养中的 RNAi 喂养：在C. elegans中敲击基因表达的高通量方法

- 首先，添加苯甲酸素和一毫升IPTG，以控制和测试含有S基底介质的文化烧瓶。在生长阶段（也称为L1幼虫）旋转幼虫管几分钟。 现在取出超标，将两个L1微升放在一个琼脂板上。将板放在解剖显微镜下，并计算幼虫的数量。

将携带非特异性RNAi质粒的RNAi细菌加入控制烧瓶，在测试瓶中加入带有基因靶向RNAi的细菌，添加的细菌量应与蠕虫数量成正比。

让幼虫通过连续摇晃生长，以确保适当的氧合。 幼虫以细菌为食。 在幼虫体内，小干扰RNA与靶向基因产生的互补性mRNA结合，抑制蛋白质表达。 最后，检查蠕虫的表型感兴趣。

在示例协议中，我们将在液体培养中用针对 daf-2基因的 RNAi 治疗 L1 幼虫。

- 要开始治疗，在 2，800毫升Fernbach 培养瓶中加入附带文本协议中描述的附加试剂 S 玄武岩介质207.45 毫升，加入每毫升苯甲酸素和1毫摩尔 IPTG 的最终浓度，然后用膜螺丝帽关闭烧瓶。

将 L1 从 25 摄氏度的孵化器中取出，并将其转移到 15 毫升管中。以 1，900倍 g 的速度将L1 离心三分钟。旋转后，取出超细剂。在显微镜下，每两微升数L1，平均从至少九滴中获得的数字。

接下来，在前一步准备的四个Fernbach培养烧瓶中加入5万只用于幼虫收集的蠕虫和10万只用于老年蠕虫收集的蠕虫，然后将控制RNAi细菌和RNAI细菌加入到与蠕虫数量成正比的兴趣基因中。

加入细菌后，用S基底完成蠕虫培养，使总体积达到300毫升。 在震动的孵化器中以25摄氏度孵化蠕虫培养，直到收集150 RPM。