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Ensayo de olfactómetro de cuatro vías

 
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Ensayo de olfactómetro de cuatro vías: un método para evaluar las respuestas de los olores en Drosophila

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- Un olfactómetro de cuatro vías es una cámara cerrada con puertos unidireccionales en cada esquina, a través de la cual puede entregar hasta cuatro olores, creando cuadrantes con perfiles de olor distintos.

Exponga las moscas al aire limpio y observe sus movimientos para asegurarse de que ningún olor esté contaminando el olfactómetro y afectando el comportamiento de la mosca.

Las moscas tienden a evitar cuadrantes con olores repelentes mientras se mueven hacia y se instalan en cuadrantes con olores atractivos.

En el siguiente protocolo, utilizaremos un olfactómetro de cuatro cuadrantes con un sistema de entrega de aire para analizar el comportamiento de la mosca en respuesta al propionato etílico, un olor a repelente y vinagre de sidra de manzana, lo cual es atractivo.

- Con al menos cinco minutos de antelación, encienda el controlador de temperatura y utilícelo en 25 grados centígrados.

- Las moscas son muy sensibles al flujo de aire, y es fundamental que el flujo de aire para cada cuadrante se verifique antes de cada experimento.

- Ahora, limpie la arena y las placas de vidrio usando 70% etanol. Limpie todas las partes dos o tres veces y déjelas secar completamente al aire antes de proceder.

Ahora, coloque la arena cargada de moscas en la cámara cerrada con luz.

Después del período de aclimatación, ejecute un experimento de control de 5 a 10 minutos en el que las moscas estén expuestas a cuatro corrientes de aire de control.

- Es fundamental probar el comportamiento de las moscas de control a sólo aire limpio. Esto verificará rápidamente que todas las condiciones de fondo son normales.

- Si es necesario, deseche las moscas y limpie de nuevo la arena. Si se sospecha de una contaminación por olor, reemplace todo el tubo. Continúe repitiendo la prueba de control con nuevas cohortes hasta que los animales no muestren preferencia por ninguno de los cuatro cuadrantes.

Entre pruebas, deseche las moscas, limpie la arena y las placas de vidrio con un 70% de etanol y reemplace los tubos del conector. Mantenga el flujo de aire seco para lavar continuamente el sistema.

- Si varios experimentos se llevan a cabo el mismo día, preste atención extrema para asegurarse de que no se deja olor en el sistema de una carrera anterior.

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