الميكروبيكشن من الأجنة الدروزوفيلا الحية: الولادة المبكرة للكواشف إلى الجنين النامي

- جمع الأجنة Drosophila الحية وإزالة المشيمات غير شفافة.

نقل الغطاء إلى غرفة الجفاف لتجفيف الأجنة جزئيا.

لإجراء الحقن المجهري، استخدم نظام حقن دقيق على مجهر متوافق. من خلال النظر من خلال قطع العينين، وتحديد كل من الأجنة والإبرة المحملة مسبقا بمحلول الحقن. افتح الإبرة وتأكد من أنها تنتج قطرات سائلة متسقة ومناسبة الحجم.

في بروتوكول المثال ، سنرى عرضا توضيحيا للتحبير الدقيق لجنين Drosophila لدراسات التصوير الحي لتقسيم الخلايا.

- قبل إعداد غطاء، وجعل الغراء heptane عن طريق unrolling الشريط المزدوج لزجة، ووضعها في زجاجة 100 ملليلتر.

قبل إعداد الأجنة، قم بعمل غرفة جفاف توضع فيها الأجنة قبل الحقن، للقيام بذلك، ضع جزءا واحدا من طبق 35 ملليمتر داخل طبق بيتري عيار 100 ملليمتر لعمل "طاولة" أضف دريريت، وهو كبريتات الكالسيوم اللامائية، حوله بحيث لا يكون ارتفاع الدريريت أعلى من "الطاولة"، والغطاء.

للبدء في إعداد الأجنة، قم أولا بجمعها من القفص العادي عن طريق تغيير طبق عصير العنب مع الخميرة كل ساعة.

باستخدام قضيب القطن يميل، ووضع طبقة واحدة من الغراء الهيبتان في خط على coverslip. الغراء لا ينبغي أن تكون لزجة وينبغي أن تجف في بضع ثوان.

وأخيرا، وضع قطعة من الشريط المزدوج لزجة على الشريحة بجانب coverslip. مع فرشاة مبللة، والتقاط بعناية الأجنة من لوحة عصير العنب ووضعها على الشريط المزدوج لزجة على الشريحة.

بعد ذلك ، استخدم نصف ملاقط للف الأجنة على الشريط المزدوج اللزج حتى ينفتح الكورون. التقط الجنين عن طريق لفه بلطف فوق المشيمة ، لذلك يلتصق بالملاقط ، ووضعه على الغراء الهيبتان على غطاء الأغطية مع الجانب الطويل من الجنين الموازي للجانب الطويل من الغطاء.

ضع 10 إلى 20 جنينا في صف واحد. أزل الغطاء وضعه في غرفة الجفاف لمدة ثلاث إلى ثماني دقائق.

أولا، ابحث عن الأجنة تحت هدف 16X. حرك الأجنة بعيدا، وابحث عن الإبرة دون تحريك المستوى البؤري.

لفتح الإبرة، ضع حافة الغطاء في مجال الرؤية، ولكن ليس حيث ستكون الإبرة، واخفض الإبرة إلى نفس المستوى البؤري.

الآن أحضر الأجنة إلى المنظر. خفض الإبرة في الزيت، وتأكد من الحصول على قطرات سائلة لطيفة من الإبرة.