活 的果蝇 胚胎的微注射：试剂的早期交付给发育中的胚胎

-收集活的德罗索菲拉胚胎，并去除它们不透明的胆汁。 然后，在玻璃盖上涂抹一行六烷胶水，即溶解在液体中的胶带粘合剂。要能够处理现在被分解的胚胎，请小心地将连续的标本对齐到粘合剂上。

将盖片转移到脱水室，使胚胎部分干燥。这将防止注射期间或注射后细胞质泄漏。接下来，取出盖片，用卤烃油覆盖胚胎，以防止进一步脱水，同时仍然允许氧气扩散到胚胎中。

要执行微注射，请在兼容的显微镜上使用微注射系统。通过观察眼睛碎片，识别胚胎和预先装上注射液的针头。打破打开针头，并确保它产生一致和适当大小的液体滴。 然后，将针头带入胚胎内，并注射适当的体积。 拿出针头，然后进入下一个，重复为剩余的胚胎注射。

在示例协议中，我们将看到对细胞分裂的活成像研究的德罗索菲拉胚胎微注射的演示。

-在设置盖片之前，通过展开双粘胶带，并将其放入100毫升的瓶子中，使希普坦胶水。加入约50毫升的黄烷，密封瓶子，并摇动几天。

在准备胚胎之前，先做一个脱水室，在注射前将胚胎放入脱水室。 为此，在100毫米的Petry盘内放入35毫米的盘子的一部分，制作一个"桌子"。加入迪尔石，这是硫酸水酸钙，在它周围，使德里埃石的高度不高于"表"，并覆盖。

要开始准备胚胎，首先从笼子里收集胚胎，每小时用酵母更换葡萄汁盘。胚胎应在收集开始后大约两小时进行成像。要准备盖片，将其放在显微镜幻灯片的一侧，并将四个角向下胶带，这样它就不会移动。

使用棉质吸附剂，在盖片上加一层止痛胶。胶水不应粘稠，应在几秒钟内干燥。如果太厚，应添加更多止痛剂。

最后，在盖片旁边的滑梯上放一块双粘胶带，用湿润的刷子，小心地从葡萄汁盘上取出胚胎，放在滑梯上的双粘胶带上。

接下来，用一半的钳子将胚胎卷在双粘胶带上，直到胆汁破裂。 通过轻轻地将胚胎滚动到胆汁上来拾取胚胎，使其粘在钳子上，并将其放在盖片上的黄烷胶上，胚胎的长侧与盖片的长侧平行。

将 10到 20个胚胎一排放置。取出盖片，将其放在脱水室三至八分钟。 时间取决于当地的湿度和注射量。接下来，将盖片放在带有真空润滑脂的金属室上。最后，用卤素油覆盖胚胎，以避免进一步脱水。 胚胎现在已准备好注射。

首先，在16X目标下找到胚胎。把胚胎移开，在不移动焦点平面的情况下找到针头。将针头集中起来，向上移动，而不向X或Y方向移动。

要打开针头，将盖片的边缘放到视野中，但不要放在针头的位置，然后将针头降低到同一焦点平面。非常小心地移动盖片，直到它击中针头并轻轻地将其折断。将针头向上移动。

现在把胚胎带进视野。 将针头放入油中，并确保从针头中获得良好的液体滴。 稳定地将胚胎移入针头，将一滴水注入胚胎，然后将胚胎移开。在注射完所有胚胎后，它们准备在具有60或100X目标的共焦显微镜上进行观察。