Encyclopedia of Experiments: Biology
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- 살아있는 Drosophila 배아를 수집하고 그들의 불투명한 chorions를 제거합니다.
커버슬립을 탈수챔버로 옮겨 배아를 부분적으로 담정합니다.
미세 주입을 수행하기 위해, 호환 현미경에 미세 주입 시스템을 사용합니다. 눈 조각을 통해 보고, 주사 용액으로 미리 로드된 배아와 바늘을 모두 식별합니다.
예제 프로토콜에서, 우리는 세포 분열의 살아있는 화상 진찰 연구를 위한 Drosophila 태아 미세 주입의 데모를 볼 것입니다.
- 커버슬립을 설정하기 전에 이중 스티커 테이프를 풀고 100 밀리리터 병에 넣어 헵탄 접착제를 만듭니다.
배아를 준비하기 전에 배아가 주입 전에 배치 될 탈수 챔버를 만듭니다.이 작업을 수행하려면 100 mm 페트리 접시 안에 35 밀리미터 접시의 한 부분을 넣어 "테이블"을 만듭니다.
배아 를 준비하기 시작하려면 먼저 매시간 효모로 포도 주스 플레이트를 변경하여 평신도 케이지에서 수집하십시오.
면에 기울어진 어플리케이터를 사용하여, 커버슬립에 한 층의 헵탄 접착제를 한 줄에 넣습니다.
마지막으로, 커버슬립 옆 슬라이드에 이중 끈적끈적한 테이프 조각을 놓습니다.
다음으로, 트위저의 절반을 사용하여 초리온이 부러질 때까지 배아를 이중 끈적끈적한 테이프 위로 굴려 주세요.
10~20개의 배아를 한 줄로 놓습니다. 커버슬립을 제거하고 탈수실에 3~8분 동안 배치하십시오.
먼저, 16X 목표하에서 배아를 찾아. 배아를 멀리 이동시키고, 초점 평면을 움직이지 않고 바늘을 찾습니다.
바늘을 열려면, 커버 슬립의 가장자리를 시야에 넣고 바늘이 있는 곳은 아니지만 바늘을 같은 초점 평면으로 낮추십시오.
이제 배아를 눈에 내다 봅니다. 바늘을 오일로 낮추고 바늘에서 좋은 액체 방울을 얻을 수 있는지 확인하십시오.
