Dissection larvaire de glande d’anneau : isolement des organes endocriniens développementaux de Drosophila

- Pour disséquer la glande de l’anneau, vous aurez besoin d’un microscope disséquant, de deux forceps, d’une aiguille à jauge fine pour servir de couteau disséquant et d’une solution tamponnée. Trouvez la glande annelé en identifiant la tête des larves, qui contient les crochets buccaux. Voyagez le long de la longueur des larves pour trouver le cerveau, qui se trouve entre le thorax et les sections abdominales. La glande annelé est plus petite que le cerveau et est située sur le dessus.

La glande céphalo-larvaire est une structure endocrinienne complexe qui contient trois organes endocriniens différents. Le corpus allatum se trouve au centre de la glande circonstance et produit de l’hormone juvénile, qui régule le développement et le vieillissement. La glande prothoracique entoure l’allatum du corpus et constitue la majorité de la structure. L’ecdysone, une hormone impliquée dans le maltage des insectes, est faite par cette glande. Au-dessous de la glande prothoracique se trouve le corpus cardiacum, qui produit de l’hormone adipocinétique, un régulateur nutritif.

Dans cet exemple, nous disséquerons les cerveaux larvaires et les glandes annulaires pour l’immunohistochimie.

- Après avoir préparé les larves, commencer la dissection du parcours dans un plat de trois centimètres rempli de PBS sous un microscope dissection. D’abord, saisir le crochet de la bouche avec des forceps. Puis, à l’aide de micro ciseaux, couper le corps à environ un tiers de la longueur de la pointe antérieure. Ensuite, maintenez la longueur antérieure avec une paire de forceps et utilisez une deuxième paire pour pousser doucement le bout de la tête dans le corps pour finalement tourner le corps larvaire à l’intérieur.

Préparer jusqu’à 20 larves de cette façon dans les 10 minutes, puis les transférer dans une solution fixative. Après 30 minutes, laver les préparations et procéder à l’immunostaining. Après avoir immunostaining les larves, utiliser une pipette jetable pour transférer les échantillons dans un plat rempli de 0,3% PBT.

Sous un microscope disséquant, saisir la cuticule ou le crochet de la bouche avec une paire de forceps. Ensuite, utilisez une aiguille de calibre 27 attachée à une seringue d’un millilitre comme un couteau pour enlever le complexe cerveau-anneau glande-disque oculaire de la cuticule du corps en coupant la pointe antérieure de l’œsophage et des disques oculaires.

Ensuite, à l’aide de forceps, séparez soigneusement l’œsophage et l’intestin du complexe du disque cerveau-anneau glande-oeil. Tirez l’intestin vers le côté postérieur, puisque l’œsophage traverse le cerveau au-dessus du cordon nerveux ventral. Enfin, pour isoler le complexe de glande cerveau-anneau, couper soigneusement les connexions entre le disque cérébral, disques oculaires, et les disques de jambe avec un couteau à aiguilles.

- Il est tout à fait essentiel d’utiliser des forceps fins avec des bords tranchants pendant la dissection. Je vous recommande également fortement d’aiguiser les forceps avec une pierre de broyage arkansas pour rassembler leurs bords sans aucune lacune.

- Pour transférer les échantillons, utilisez une micropipette avec une large pointe d’alésage. Déposez les échantillons sur le centre de la glissière de verre. Ensuite, utilisez des forceps pour positionner les échantillons sur leurs côtés ventraux afin que la glande de l’anneau, qui est située sur le côté dorsal du cerveau, puisse être photographiée. Ensuite, inclinez la glissière et essuyez autant de PBT excédentaire que possible. Puis, placez une goutte de réacompteur de montage près des échantillons et utilisez des forceps pour abaisser lentement un glissement sur le reagent, puis sur les échantillons.