Dissecção da glândula do anel larval: isolamento de órgãos endócrinos do desenvolvimento de Drosophila

- Para dissecar a glândula anelada, você precisará de um microscópio dissecando, dois fórceps, uma agulha de bitola fina para servir como uma faca de dissecação, e uma solução tamponada. Encontre a glândula anelada identificando a cabeça das larvas, que contém os ganchos da boca.

A glândula do anel larval é uma estrutura endócrina complexa que contém três diferentes órgãos endócrinos. O corpus allatum fica no centro da glândula anelada e produz hormônio juvenil, que regula o desenvolvimento e o envelhecimento. A glândula protorácica circunda o corpus allatum e compõe a maior parte da estrutura. Ecdysone, hormônio envolvido em malte de insetos, é feita por esta glândula.

Neste exemplo, dissecaremos cérebros larvais e glândulas anelares para imunohistoquímica.

- Depois de preparar as larvas, inicie a dissecação do curso em um prato de três centímetros cheio de PBS sob um microscópio dissecando. Primeiro, segure o gancho da boca com fórceps. Em seguida, usando micro tesoura, corte o corpo em cerca de um terço do comprimento da ponta anterior. Em seguida, segure o comprimento anterior com um par de fórceps e use um segundo par para empurrar suavemente a ponta da cabeça para o corpo para finalmente transformar o corpo larval por dentro.

Prepare até 20 larvas desta forma dentro de 10 minutos e depois transfira-as para uma solução fixa. Após 30 minutos, lave os preparos e proceda com a imunostaining. Após imunossuagem das larvas, use uma pipeta descartável para transferir as amostras para um prato cheio de PBT de 0,3%.

Sob um microscópio dissecando, segure a cutícula ou o gancho bucal com um par de fórceps. Em seguida, use uma agulha de calibre 27 presa a uma seringa de um mililitro como uma faca para remover o complexo de disco de glândula do anel cerebral da cutícula corporal cortando a ponta anterior do esôfago e discos oculares.

Em seguida, usando fórceps, separe cuidadosamente o esôfago e o intestino do complexo de disco de olho do anel cerebral. Puxe o intestino para o lado posterior, uma vez que o esôfago passa pelo cérebro acima do fio nervoso ventral.

- É bastante essencial usar fórceps finos com bordas afiadas durante a dissecção. Eu também recomendo fortemente que você afie fórceps com uma pedra de moagem do Arkansas para unir suas bordas sem quaisquer lacunas.

- Para transferir as amostras, use uma micropipette com uma ponta larga de furo. Deposite as amostras no centro da lâmina de vidro. Em seguida, use fórceps para posicionar as amostras em seus lados ventral para que a glândula anelada, que está localizada no lado dorsal do cérebro, possa ser visualizada. Em seguida, incline o slide e limpe o máximo possível do excesso de PBT. Em seguida, coloque uma gota de reagente de montagem perto das amostras e use fórceps para baixar lentamente as tampas do deslizamento e, em seguida, sobre as amostras.