Larvring körtel dissekering: Isolering av utvecklingsmässiga endokrina organ från Drosophila

- För att dissekera ringkörteln behöver du ett dissekerande mikroskop, två tångar, en finspårig nål för att fungera som en dissekeringskniv och en buffrad lösning.

Larvringskörteln är en komplex endokrin struktur som innehåller tre olika endokrina organ. Corpus allatum sitter i mitten av ringkörteln och producerar juvenilt hormon, som reglerar utveckling och åldrande. Prothoracic körtel omger corpus allatum och utgör majoriteten av strukturen. Ecdysone, ett hormon som är involverat i insektsmalning, görs av denna körtel. Under prothoracic körtel är corpus hjärtum, som producerar adipokinetiskt hormon, en näringsregulator.

I det här exemplet kommer vi att dissekera larvhjärnor och ringkörtlar för immunohistokemi.

- Efter att ha förberett larverna, starta kursav dissekeringen i en tre centimeters skål fylld med PBS under ett dissekerande mikroskop. Först, greppa munkroken med tång. Sedan, med hjälp av mikrosax, skär kroppen på ungefär en tredjedel av längden från den främre spetsen.

Förbered upp till 20 larver på detta sätt inom 10 minuter och överför dem sedan till fixativ lösning.

Under ett dissekerande mikroskop, greppa nagelbandet eller munkroken med ett par tångar. Använd sedan en 27-gauge nål fäst vid en en milliliter spruta som en kniv för att ta bort hjärnringskörtel- ögonskivakomplexet från kroppssnittet genom att skära bort matstrupens och ögonskivornas främre spets.

Därefter, med hjälp av tång, separera försiktigt matstrupen och tarmen från hjärnringskörtel- ögonskivakomplexet. Dra ut tarmen till den bakre sidan, eftersom matstrupen passerar genom hjärnan ovanför ventrala nervsladden.

- Det är ganska viktigt att använda fina tångar med vassa kanter under dissekering.

- För att överföra proverna, använd en mikropipett med en bred borrspets. Deponera proverna på mitten av glasrutschbanan. Använd sedan tång för att placera proverna på deras ventrala sidor så att ringkörteln, som ligger på hjärnans dorsala sida, kan avbildas. Därefter lutar du glidet och torkar av så mycket av överskottet PBT som möjligt.