Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Préparer les larves de Drosophila à un test de sonde thermique, recueillir les animaux du stade de développement désiré et transférer les larves simples sur une plaque d’essai avec un mince film d’eau. L’eau permet aux larves de se déplacer librement sans coller à la surface de la plaque.
Les larves de drosophiles détectent les stimuli thermiques nocifs par l’intermédiaire de neurones sensoriels multidendritiques dans leur épiderme connu sous le nom de nocicepteurs. Ceux-ci ne tirent pas jusqu’à ce qu’un certain seuil sensoriel soit atteint, comme des températures élevées potentiellement nocives.
Réglez la sonde thermique à une température qui dépassera ce seuil sensoriel et provoquera le feu des nocicepteurs. Appuyez doucement sur la pointe de la sonde contre la larve pour appliquer de la chaleur. La larve répondra à la température nocive par des comportements thermo-nociceptifs, se retirant de la sonde. Arrêtez lorsque la larve présente un rôle de 360 degrés loin de la sonde thermique, ou lorsqu’un temps défini s’est écoulé. Enregistrez le temps de réponse.
Dans le protocole de l’exemple, nous verrons une démonstration d’un essai localisé de sonde thermique sur les larves de Drosophila au début du troisième stade.
- Tout d’abord, prédéfinir la température de la sonde thermique au point d’ensemble désiré. Utilisez un pinceau ou des forceps pour transférer doucement une larve individuelle sur une plate-forme plate, en veillant à ce que la lave soit recouverte d’un mince film d’eau.
- Afin de minimiser la variation de la pression, ainsi que d’assurer le bon emplacement et l’angle de la sonde thermique, la pratique rend parfait.
- Appuyez doucement sur la pointe de la sonde contre la larve au segment A4, en appliquant une légère pression avec la pointe à un angle d’environ 45 degrés entre la sonde et la surface de la larve. La pression doit provoquer une légère indéntation à la surface de la larve, et sera généralement suffisante pour empêcher la locomotion. Continuer à stimuler la larve jusqu’à ce qu’une réponse de retrait soit exposée ou jusqu’à ce que la coupure de 20 secondes soit atteinte.
Les larves qui réagissent montrent généralement d’abord un comportement préliminaire de levage de la tête et de la queue, suivie du comportement de retrait du roulis d’au moins 360 degrés. Une fois que le comportement de retrait est initié, relâchez le contact avec la sonde et enregistrez la latence, ou le temps nécessaire au retrait. Si aucun comportement de retrait n’est observé dans les 20 secondes, alors la larve est un non-répondeur.
