局所熱プローブアッセイ:ショ ウジョウバエ 幼虫における高温の切り分を評価する方法

-ショウジョウバエ幼虫を熱プローブアッセイ用に準備し、目的の発達段階の動物を収集し、水の薄膜で試験板に単一の幼虫を移すため、水はプレート表面に付着することなく幼虫が自由に動くことを可能にします。

ショウジョウバエ幼虫は、ノシセプターとして知られている表皮の多点下感覚ニューロンを通して有害な熱刺激を検出します。

熱プローブをこの感覚閾値を超える温度に設定し、ノシセプターを発射させる温度に設定し、ノシセプターを発射させる。

このプロトコル例では、初期の第3段階のインスターショウジョウバエで局所的な熱プローブアッセイのデモンストレーションが見える。

-まず、熱プローブの温度を希望の設定ポイントに事前設定します。ペイントブラシまたは鉗子を使用して個々の幼虫を平らなプラットフォームに静かに移し、溶岩が薄膜の水で覆われていることを確認します。

-圧力の変動を最小限に抑えるため、また、ヒートプローブの正しい位置と角度を確保するために、練習は完璧になります。

- セグメントA4で幼虫に対してプローブ先端を軽く押し付け、プローブと幼虫の表面との間に約45度の角度で先端に光圧を加えます。

幼虫の反応は、通常、最初に頭と尾を持ち上げる予備的な行動を示し、続いて少なくとも360度転がる離脱行動を示す。離脱行動が開始されると、プローブとの接触を解除し、待ち時間を記録するか、撤退までの時間を記録する。20秒以内に離脱行動が観察されない場合、幼虫は非応答者である。