Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Подготовить личинки дрозофилы к анализу теплового зонда, собрать животных желаемой стадии развития и перенести одиночные личинки на испытательную пластину с тонкой пленкой воды.
Личинки дрозофилы обнаруживают вредные тепловые стимулы через мультидендритные сенсорные нейроны в эпидермиде, известные как ноцицепторы.
Установите тепловой зонд до температуры, которая преодолеет этот сенсорный порог, и привести к ноцицепторов огонь. Аккуратно нажмите кончик зонда против личинки применять тепло. личинка будет реагировать на вредные температуры с термо-ноцицептивного поведения, снятие с зонда. Стоп, когда личинка экспонатов 360-градусная роль от теплового зонда, или когда определенное время прошло.
В примере протокола, мы увидим демонстрацию локализованного теплового зонда анализ на начале третьей instar личинки Drosophila.
- Во-первых, предустановьте температуру теплового зонда до нужной заданной точки. Используйте кисть или типсы, чтобы аккуратно перенести отдельные личинки на плоскую платформу, гарантируя, что лава покрыта тонкой пленкой воды.
- Для того, чтобы свести к минимуму изменение давления, а также обеспечить правильное расположение и угол теплового зонда, практика делает совершенным.
- Аккуратно нажмите наконечник зонда против личинки на сегменте A4, применяя давление света с кончиком примерно под углом 45 градусов между зондом и поверхностью личинки. Давление должно вызвать небольшое отступы на поверхности личинки, и, как правило, будет достаточно, чтобы предотвратить движение. Продолжайте стимулировать личинку, пока ответ на вывод выставлен или до тех пор, пока 20-секундный разрез не будет достигнут.
Отвечая личинки обычно сначала показывают предварительное поведение подъема головы и хвоста, а затем вывод поведение прокатки по крайней мере 360 градусов. После вывода поведение начато, отпустите контакт с зондом, и запись задержки, или время, затяжка для вывода. Если не вывод поведение наблюдается в течение 20 секунд, то личинка не-ответчик.
