Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- För att förbereda Drosophila larver för en värmesondanalys, samla djur i önskat utvecklingsstadium och överför enstaka larver på en testplatta med en tunn vattenfilm.
Drosophila larver upptäcker skadliga termiska stimuli genom multidendritiska sensoriska nervceller i deras epidermis som kallas nociceptorer. Dessa avfyras inte förrän en viss sensorisk tröskel uppnås, såsom potentiellt skadliga höga temperaturer.
Ställ värmesonden på en temperatur som kommer att övervinna denna sensoriska tröskel och orsaka att nociceptorerna avfyras. Tryck försiktigt sondens spets mot larven för att applicera värme. Larven kommer att svara på den skadliga temperaturen med termo-nociceptiva beteenden, dra sig tillbaka från sonden.
I exempelprotokollet kommer vi att se en demonstration av en lokaliserad värmesondanalys på tidiga tredje instar Drosophila larver.
- För det första, förinställning av temperaturen på den termiska sonden till önskad börtpunkt. Använd en pensel eller tång för att försiktigt överföra en enskild larva till en platt plattform och se till att lavan är täckt av en tunn vattenfilm.
- För att minimera tryckvariationen, samt för att säkerställa rätt placering och vinkel på värmesonden, gör övningen perfekt.
- Tryck försiktigt sondspetsen mot larven vid segment A4, tryck med spetsen i ungefär 45 graders vinkel mellan sonden och larvens yta.
Svarande larver visar vanligtvis först ett preliminärt beteende för att lyfta huvudet och svansen, följt av abstinensbeteendet att rulla minst 360 grader.
