温度梯度测定：在 德罗索菲拉拉 瓦测试温度偏好的方法

- 为了测试果蝇幼虫的温度偏好，通过加热铝检测板的一侧和冷却另一侧来创建温度梯度。铝具有高导热性，这意味着热量被有效地传输，从而产生稳定的线性温度梯度。 系统平衡后，记录同大小温度区域中整个板块的温度，然后用干净的幼虫加载板的中心。

覆盖整个系统，以消除来自强光的干扰并开始试验。 幼虫通过梯度分布，避免过热或太冷的逆向区域，并定居在有利温度区域。这种行为称为热轴。要评估幼虫的温度偏好，请记录每个温度区域中的动物数量。

在示例协议中，我们将看到如何设置18 至 28 摄氏度的单向温度梯度，以及在检测过程中如何处理幼虫。

- 要准备单向梯度，首先，为检测创建潮湿的环境环境。 将两个铝块连接到相隔10厘米的湿纸巾上，与单独的水浴池相连。 水浴需要提前加热。 接下来，制作100毫升的1%的糖，并在水平表面上向每个检测板添加25毫升。凝固后，用三聚氰胺海绵轻轻摩擦表面，使表面略显粗。

然后，为了促进有效的温度转移，用喷雾瓶送来的水填补检测板中铝块之间的任何缝隙。现在，将检测板放在铝块上，并确保从两个边缘的标界线为 2厘米，以与铝块的边缘完全匹配。

接下来，将一层水喷到盘子表面，这样凝胶就不会干涸。 接下来，用纸板箱覆盖系统，以减少蒸发，并帮助稳定凝胶表面的温度。等待5至10分钟，使温度平衡。然后，检查至少 12 个位置的板面温度，以确保整个表面温度均匀，给予或采取 2 摄氏度。 然后，更换盒子盖，直到执行检测。

首先，取出凝胶上的纸板箱，并快速检查凝胶表面温度。 如果表面干燥，在表面喷洒少量水。 如果凝胶良好，则使用小型画笔在每个板的中心装载 100到 200 个幼虫。然后，在每个检测板上盖上盖子，以捕获幼虫，并用纸板箱盖住设置，以防止光线照射。 检测正在进行中。

10至 30 分钟后，取出纸板箱和微板盖。然后，从上面拍摄板，记录幼虫的位置。将盒子放在相机上方，以避免凝胶表面反射。要清理盘子，请吸气所有幼虫，无论它们可能散落在哪里。

现在，使用图像分析软件计算每个区域幼虫的百分比分布，根据测定板上的分界线每2厘米划一条线，并计算每个区域的幼虫数量。

-计数时，忽略分布在距离每个边缘0.5厘米的区域的幼虫。凝胶厚度和温度条件在边缘附近不均匀。