Analyse du gradient de température : méthode pour tester la préférence de température chez les larves de drosophiles

- Pour tester la préférence de température des larves de Drosophila, créer un gradient de température en chauffant d’un côté d’une plaque d’essai en aluminium et en refroidissant l’autre. L’aluminium a une conductivité thermique élevée, ce qui signifie que la chaleur est transférée efficacement, créant un gradient de température linéaire stable. Après que le système a equilibré, enregistrez les températures à travers la plaque dans les zones de température de même taille, puis chargez le centre de la plaque avec des larves propres.

Couvrir l’ensemble du système pour éliminer les interférences de la lumière vive et commencer l’essai. Les larves se répartir à travers le gradient, en évitant les zones aversives qui sont trop chaudes ou trop froides, et s’installer dans des zones de températures favorables. Ce comportement est appelé thermotaxis. Pour évaluer la préférence de température des larves, enregistrez le nombre d’animaux dans chaque zone de température.

Dans le protocole d’exemple, nous verrons comment mettre en place un gradient de température à direction unique entre 18 et 28 degrés Celsius, et comment les larves sont manipulées pendant l’analyse.

- Pour préparer un gradient unidirectnel, d’abord, créer un environnement ambiant humide pour l’analyse. Placez deux blocs d’aluminium reliés à des bains d’eau séparés sur des serviettes en papier humide à 10 centimètres l’un de l’autre. Les bains d’eau doivent être réchauffés à l’avance. Ensuite, faites 100 millilitres de 1% d’agarose et ajoutez 25 millilitres à chaque plaque d’essai sur une surface plane. Une fois que l’agarose s’est solidifié, frottez doucement la surface avec une éponge de melamine pour rendre la surface légèrement grossière.

Ensuite, pour favoriser un transfert efficace de température, comblez les lacunes entre les blocs d’aluminium dans les plaques d’analyse avec de l’eau fournie à partir d’un vaporisateur. Maintenant, placez les plaques d’analyse sur les blocs d’aluminium et assurez-vous que les démarcations sont de 2 centimètres de chaque bord pour correspondre exactement aux bords des blocs d’aluminium.

Ensuite, vaporisez un film d’eau sur la surface des plaques afin que les gels ne se dessèchent pas. Ensuite, recouvrez le système d’une boîte en carton pour réduire l’évaporation et aider à stabiliser la température de la surface du gel. Attendez 5 à 10 minutes pour que la température s’équilibre. Ensuite, vérifiez la température de surface de la plaque à au moins 12 endroits pour vous assurer qu’il y a une température constante partout, donnez ou prenez 2 degrés Celsius. Ensuite, remplacez le couvercle de la boîte jusqu’à ce que l’essai soit effectué.

Tout d’abord, retirez la boîte en carton sur le gel et vérifiez rapidement la température de surface du gel. Si la surface est sèche, vaporisez une petite quantité d’eau à la surface. Si le gel est bon, chargez 100 à 200 larves au centre de chaque plaque à l’aide d’un petit pinceau. Ensuite, placez un couvercle sur chaque plaque d’analyse pour piéger les larves et couvrir l’installation d’une boîte en carton pour éviter l’exposition à la lumière. Le test est maintenant en cours.

Après 10 à 30 minutes, retirer la boîte en carton et le couvercle de la microplaque. Ensuite, photographiez les plaques d’en haut pour enregistrer la position des larves. Placez la boîte au-dessus de la caméra pour éviter la réflexion à la surface du gel. Pour nettoyer la plaque, aspirez toutes les larves partout où elles se sont dispersées.

Calculez maintenant la répartition en pourcentage des larves dans chaque zone à l’aide d’un logiciel d’analyse d’images. Faites des lignes tous les 2 centimètres en fonction des démarcations sur la plaque d’analyse et comptez le nombre de larves dans chaque zone.

- Lors du comptage, ignorer les larves réparties dans les régions à 0,5 centimètre de chaque bord. L’épaisseur du gel et les conditions de température ne sont pas uniformes près du bord.