בדיקת חום הדרגתית: שיטה לבדיקת העדפת טמפרטורה בזחלי דרוזופילה

- כדי לבדוק את העדפת הטמפרטורה של זחלים Drosophila, ליצור שיפוע טמפרטורה על ידי חימום צד אחד של צלחת מבחני אלומיניום וקירור השני. אלומיניום יש מוליכות תרמית גבוהה, כלומר החום מועבר ביעילות, יצירת שיפוע טמפרטורה ליניארית יציבה. לאחר שהמערכת השתווה, להקליט את הטמפרטורות על פני הצלחת באזורי טמפרטורה בגודל זהה, ולאחר מכן לטעון את מרכז הצלחת עם זחלים נקיים.

לכסות את המערכת כולה כדי למנוע הפרעות מאור בהיר ולהתחיל את המשפט. זחלים להפיץ דרך השיפוע, הימנעות אזורים מרתיעה כי הם חמים מדי או קר מדי, להתיישב באזורים של טמפרטורות חיוביות. התנהגות זו נקראת thermotaxis. כדי להעריך את העדפת הטמפרטורה של הזחלים, לרשום את מספר בעלי החיים בכל אזור טמפרטורה.

בפרוטוקול הדוגמה, נראה כיצד להגדיר שיפוע טמפרטורה בכיוון אחד בין 18 ל -28 מעלות צלזיוס, וכיצד הזחלים מטופלים במהלך הבחינה.

- כדי להכין שיפוע חד כיווני, ראשית, צור סביבת סביבה לחה לבדיקה. מניחים שני גושי אלומיניום המחוברים לאמבטיות מים נפרדות על מגבות נייר רטובות במרחק של 10 ס"מ זו מזו.

לאחר מכן, כדי לקדם העברת טמפרטורה יעילה, מלאו את כל הפערים בין גושי האלומיניום בלוחות התספורת במים המועברים מבקבוק ספריי.

לאחר מכן, לרסס סרט של מים על פני השטח של הצלחות, כך הג'לים לא להתייבש. לאחר מכן, לכסות את המערכת עם קופסת קרטון כדי להפחית את האידוי ולעזור לייצב את הטמפרטורה של משטח הג'ל. לחכות 5 עד 10 דקות כדי לאפשר לטמפרטורה להתאזן. לאחר מכן, לבדוק את טמפרטורת פני השטח על הצלחת לפחות 12 מקומות כדי להבטיח כי יש טמפרטורה אחידה לאורך, לתת או לקחת 2 מעלות צלזיוס.

ראשית, להסיר את קופסת הקרטון מעל הג'ל ולבדוק במהירות את טמפרטורת משטח הג'ל. אם פני השטח יבשים, לרסס כמות קטנה של מים על פני השטח. אם הג'ל טוב, ואז לטעון 100 עד 200 זחלים במרכז כל צלחת באמצעות מברשת צבע קטנה.

לאחר 10 עד 30 דקות, להסיר את קופסת הקרטון ואת מכסה microplate. לאחר מכן, לצלם את הצלחות מלמעלה כדי להקליט את המיקום של הזחלים.

עכשיו, לחשב את התפלגות אחוז הזחלים בכל אזור באמצעות תוכנת ניתוח תמונה.

- בעת הספירה, התעלם זחלים מופץ באזורים 0.5 ס"מ מכל קצה. עובי ג'ל ותנאי טמפרטורה אינם אחידים ליד הקצה.