तापमान ढाल परख: ड्रोसोफिला लार्वा में तापमान वरीयता का परीक्षण करने के लिए एक विधि

- ड्रोसोफिला लार्वा के तापमान वरीयता का परीक्षण करने के लिए, एक एल्यूमीनियम परख प्लेट के एक तरफ गर्म करके और दूसरे को ठंडा करके तापमान ढाल बनाएं। एल्यूमीनियम में उच्च थर्मल चालकता है, जिसका अर्थ है गर्मी कुशलता से स्थानांतरित की जाती है, एक स्थिर रैखिक तापमान ढाल बनाता है। सिस्टम के बराबर होने के बाद, समान आकार के तापमान क्षेत्रों में प्लेट के पार तापमान रिकॉर्ड करें, फिर प्लेट के केंद्र को साफ लार्वा के साथ लोड करें।

उज्ज्वल प्रकाश से हस्तक्षेप को खत्म करने और परीक्षण शुरू करने के लिए पूरी प्रणाली को कवर करें । लार्वा ढाल के माध्यम से वितरित, बहुत गर्म या बहुत ठंडा है कि भारी क्षेत्रों से परहेज है, और अनुकूल तापमान के क्षेत्रों में बसने । इस व्यवहार को थर्मोटैक्सिस कहा जाता है । लार्वा के तापमान वरीयता का आकलन करने के लिए, प्रत्येक तापमान क्षेत्र में जानवरों की संख्या रिकॉर्ड ।

उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम देखेंगे कि 18 से 28 डिग्री सेल्सियस के बीच एक दिशा तापमान ढाल कैसे स्थापित किया जाए, और परख के दौरान लार्वा को कैसे संभाला जाता है।

- एक दिशात्मक ढाल तैयार करने के लिए, सबसे पहले, परख के लिए एक आर्द्र परिवेश वातावरण बनाएं। गीले कागज के तौलिए पर अलग-अलग पानी स्नान से जुड़े दो एल्यूमीनियम ब्लॉक रखें 10 सेंटीमीटर अलग. पानी के स्नान को पहले से गर्म करने की आवश्यकता है। इसके बाद, 1% के 100 मिलीलीटर को एक स्तर की सतह पर प्रत्येक परख प्लेट में जोड़ें। एक बार एगर उठे होने के बाद सतह को धीरे से एक मेलामाइन स्पंज के साथ रगड़ें ताकि सतह को थोड़ा मोटा बनाया जा सके।

फिर, कुशल तापमान हस्तांतरण को बढ़ावा देने के लिए, एक स्प्रे बोतल से दिया पानी के साथ परख प्लेटों में एल्यूमीनियम ब्लॉकों के बीच किसी भी अंतराल को भरने । अब, एल्यूमीनियम ब्लॉकों पर परख प्लेटें रखें और सुनिश्चित करें कि सीमांकन या तो किनारे से 2 सेंटीमीटर के लिए बिल्कुल एल्यूमीनियम ब्लॉकों के किनारों मैच कर रहे हैं ।

इसके बाद, प्लेटों की सतह पर पानी की एक फिल्म स्प्रे करें ताकि जैल सूख न जाए। इसके बाद, वाष्पीकरण को कम करने के लिए सिस्टम को कार्डबोर्ड बॉक्स से ढक दें और जेल की सतह के तापमान को स्थिर करने में मदद करें। तापमान को बराबर करने की अनुमति देने के लिए 5 से 10 मिनट तक प्रतीक्षा करें। इसके बाद, कम से कम 12 स्थानों में प्लेट पर सतह के तापमान की जांच करें ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि पूरे समय में एक भी तापमान हो, दें या 2 डिग्री सेल्सियस लें। फिर, बॉक्स कवर को तब तक बदलें जब तक कि परख नहीं हो जाती।

सबसे पहले, कार्डबोर्ड बॉक्स को जेल के ऊपर हटा दें और जेल की सतह के तापमान की जल्दी से जांच करें। यदि सतह सूखी है, तो सतह पर थोड़ी मात्रा में पानी का छिड़काव करें। यदि जेल अच्छा है, तो एक छोटे तूलिका का उपयोग करके प्रत्येक प्लेट के केंद्र में 100 से 200 लार्वा लोड करें। फिर, लार्वा को ट्रैप करने के लिए प्रत्येक परख प्लेट पर ढक्कन रखें और प्रकाश जोखिम को रोकने के लिए एक कार्डबोर्ड बॉक्स के साथ सेटअप को कवर करें।

10 से 30 मिनट के बाद, कार्डबोर्ड बॉक्स और माइक्रोप्लेट ढक्कन को हटा दें। इसके बाद, लार्वा की स्थिति को रिकॉर्ड करने के लिए ऊपर से प्लेटों की तस्वीर लें। जेल की सतह पर प्रतिबिंब से बचने के लिए बॉक्स को कैमरे के ऊपर रखें। प्लेट को साफ करने के लिए, सभी लार्वा को जहां भी बिखरे हुए हो सकता है, उसे बढ़ाएं।

अब इमेज एनालिसिस सॉफ्टवेयर का उपयोग कर प्रत्येक जोन में लार्वा के प्रतिशत वितरण की गणना करें। परख प्लेट पर सीमांकन के आधार पर हर 2 सेंटीमीटर लाइन बनाएं और प्रत्येक जोन में लार्वा की संख्या गिनें।

- गिनती करते समय, प्रत्येक किनारे से 0.5 सेंटीमीटर क्षेत्रों में वितरित लार्वा को अनदेखा करें। जेल की मोटाई और तापमान की स्थिति किनारे के पास एक समान नहीं है।