Test del gradiente di temperatura: un metodo per testare la preferenza di temperatura nelle larve di Drosophila

- Per testare la preferenza di temperatura delle larve di Drosophila, creare un gradiente di temperatura riscaldando un lato di una piastra di dosaggio in alluminio e raffreddando l'altro. L'alluminio ha un'elevata conduttività termica, il che significa che il calore viene trasferito in modo efficiente, creando un gradiente di temperatura lineare stabile. Dopo che il sistema è stato equilibrato, registrare le temperature attraverso la piastra in zone di temperatura di dimensioni uguali, quindi caricare il centro della piastra con larve pulite.

Coprire l'intero sistema per eliminare le interferenze dalla luce intensa e avviare lo studio. Le larve si distribuiscono attraverso il gradiente, evitando zone avverse troppo calde o troppo fredde, e si depositano in zone a temperature favorevoli. Questo comportamento è chiamato termotassi. Per valutare la preferenza di temperatura delle larve, registrare il numero di animali in ogni zona di temperatura.

Nel protocollo di esempio, vedremo come impostare un gradiente di temperatura a direzione singola tra 18 e 28 gradi Celsius e come vengono gestite le larve durante il test.

- Per preparare una sfumatura direzionale singola, in primo luogo, creare un ambiente ambiente umido per il saggio. Posizionare due blocchi di alluminio collegati a bagni d'acqua separati su tovaglioli di carta bagnati distanti 10 centimetri l'uno dall'altro. I bagni d'acqua devono essere riscaldati in anticipo. Successivamente, fare 100 millilitri dell'1% di agarosio e aggiungere 25 millilitri a ogni piastra di dosaggio su una superficie piana. Una volta che l'agarosio si è solidificato, strofinare delicatamente la superficie con una spugna di melammina per rendere la superficie leggermente grossolana.

Quindi, per promuovere un efficiente trasferimento di temperatura, riempire eventuali spazi tra i blocchi di alluminio nelle piastre di dosaggio con acqua erogata da un flacone spray. Ora, posizionare le piastre di dosaggio sui blocchi di alluminio e assicurarsi che le demarcazioni siano a 2 centimetri da entrambi i bordi per corrispondere esattamente ai bordi dei blocchi di alluminio.

Successivamente, spruzzare un film d'acqua sulla superficie delle piastre in modo che i gel non si asciughino. Quindi, coprire il sistema con una scatola di cartone per ridurre l'evaporazione e contribuire a stabilizzare la temperatura della superficie del gel. Attendere da 5 a 10 minuti per consentire alla temperatura di equilibrare. Quindi, sostituire il coperchio della scatola sulla piastra in almeno 12 posizioni per assicurarsi che vi sia una temperatura uniforme in tutto, dare o assumere 2 gradi Celsius. Quindi sostituire il coperchio della scatola fino a quando il test non viene eseguito.

In primo luogo, rimuovere la scatola di cartone sul gel e controllare rapidamente la temperatura della superficie del gel. Se la superficie è asciutta, spruzzare una piccola quantità di acqua sulla superficie. Se il gel è buono, caricare da 100 a 200 larve al centro di ogni piastra utilizzando un piccolo pennello. Quindi, posizionare un coperchio su ogni piastra di dosaggio per intrappolare le larve e coprire l'impostazione con una scatola di cartone per prevenire l'esposizione alla luce. Il test è ora in corso.

Dopo 10-30 minuti, rimuovere la scatola di cartone e il coperchio della micropiastra. Quindi, fotografare le lastre dall'alto per registrare la posizione delle larve. Posizionare la scatola sopra la fotocamera per evitare la riflessione sulla superficie del gel. Per pulire la piastra, aspirare tutte le larve ovunque si siano disperse.

Ora, calcolate la distribuzione percentuale delle larve in ogni zona utilizzando il software di analisi delle immagini. Fate linee ogni 2 centimetri in base alle demarcazioni sulla piastra di dosaggio e contate il numero di larve in ogni zona.

- Durante il conteggio, ignorare le larve distribuite nelle regioni a 0,5 centimetri da ogni bordo. Lo spessore del gel e le condizioni di temperatura non sono uniformi vicino al bordo.