温度勾配アッセイ:ショ ウジョウバエ 幼虫の温度設定を試験する方法

- ショウジョウバエ幼虫の温度嗜好をテストするには、アルミニウムアッセイプレートの一方の側を加熱してもう一方の側を冷却して温度勾配を作成します。

明るい光からの干渉を排除し、試験を開始するためにシステム全体をカバーし、幼虫は、あまりにも暖かいまたは寒すぎる回避ゾーンを避け、良好な温度のゾーンに落ち着く勾配を介して配布します。

プロトコル例では、18~28°Cの単方向温度勾配を設定する方法と、アッセイ中に幼虫がどのように処理されるかを見ていきます。

- 単方向グラデーションを準備するには、まず、 アッセイの湿気のある周囲環境を作る。濡れたペーパータオルに10センチ離れた濡れた水浴に接続された2つのアルミニウムブロックを置く。水浴は事前に温める必要がある。次に、1%アガロースの100ミリリットルを作り、各アッセイプレートに25ミリリットルを加えて、アガロースが固まったら、表面を少し溶かして溶けてこすり、

次に、効率的な温度移動を促進するために、アッセイプレート内のアルミニウムブロック間の隙間をスプレーボトルから送達した水で埋めます。

次に、ゲルが乾燥しないように、プレートの表面に水のフィルムをスプレーします。 次に、蒸発を減らし、ゲル表面の温度を安定させるために段ボール箱でシステムを覆います。温度が平衡化するまで5~10分待ちます。

まず、段ボール箱をゲルの上に取り出し、ゲル表面温度を素早く確認してください。表面が乾いている場合は、少量の水を表面にスプレーします。ゲルが良い場合は、小さなペイントブラシを使って各プレートの中央に100〜200本の幼虫を積み込みます。

10~30分後、段ボール箱とマイクロプレートの蓋を取り出し、上からプレートを撮影して幼虫の位置を記録します。

次に、画像解析ソフトウェアを使用して各ゾーンの幼虫の分布率を計算します。アッセイプレートの境界に基づいて2センチメートルごとにラインを作り、各ゾーンの幼虫の数を数えます。

-カウントする場合は、各エッジから0.5センチメートルの領域に分布する幼虫を無視してください。