德罗索菲拉 活动监视器（DAM）：测量苍蝇运动活动的方法

- Drosophila活动监测器（DAM）的中心活动管一端装有飞行食物，另一端装有透气管。在持续数天甚至数周的实验中，该设置可容纳单只苍蝇。

将 DAM 置于一个受控环境中，如温度、湿度和光循环设定的孵化器。在黑暗的房间里进行实验，如有必要，使用红外光源处理设备，与明亮的光线不同，它不会影响苍蝇的昼夜系统。

要记录运动活动，将仪器连接到存储DAM 探测器读数的计算机系统。 DAM 的电子设备不断检测通过每个管子中点发射的红外光束的完整性，并定期将数据上传到计算机系统。

当苍蝇在管内来回行走时，它穿过红外光束。 这些中断被 DAM按时间计算，作为飞行活动的量度。

在下列协议中，我们将使用DAM系统研究德罗索菲拉成年男性的昼夜节律。

-在将苍蝇加载到活动管中之前，打开用于存放活动监视器的孵化器。使用孵化器控制调节温度，并根据所需的实验设计，使用 DAM 系统光控制器或孵化器自己的光控制系统设置光/暗态。

接下来，用二氧化碳给苍蝇麻醉。然后，用精美的画笔，轻轻地将一只苍蝇转移到活动管中。抓住一块约半英寸的细钳子的纱线中间，将纱线插入活动管的非食物末端，以堵塞开口，防止苍蝇在实验期间逃跑，同时允许气流进入管子。

保持管子放在它的一侧，直到苍蝇醒来，以防止苍蝇卡在食物上。 将管子插入活动监视器。随着三动力学显示器的更新，更紧凑的模型，有必要保持管到位用橡皮筋，以确保红外光束通过管在中心位置。

最后，将活动监视器放入孵化器，并通过电话线将其连接到数据收集系统。使用 DAM系统收集软件检查所有监视器是否正确连接，并且从每个监视器中收集数据。

现在，苍蝇已经加载到活动管和运动活动监测系统准备就绪，数据现在可以记录。苍蝇通过将它们暴露在所需的光/暗或LD和温度机制中进行同步和训练，为期两到五天。 最常用的诱捕条件是光/暗周期 12 小时光/12 小时黑暗在 25 摄氏度。

对于与此协议相关的昼夜节律研究，孵化器中灯亮的时间被定义为时代数时间 0，所有其他时间都与此值相对应。根据标准的 12：12 LD 条件，野生类型德罗索菲拉梅拉诺加斯特通常表现出两轮活动：一个以ZT0为中心，称为早高峰，另一个围绕ZT12，称为晚间高峰。

自由运行的运动活动节奏在禁制期后在恒定的黑暗和温度条件下测量。在LD的最后一天的黑暗阶段，光周期的设置随时可以改变，因此实验的后一天代表DD的第一天。DD数据收集的七天足以计算苍蝇的昼夜周期、振幅或节奏强度。

一般来说，为了获得特定基因型的可靠自由运行周期，至少需要16只苍蝇的样本量。实验结束时，使用DAM系统软件收集的原始二进制数据被下载到便携式数据存储设备上，例如USB密钥。

原始二进制数据使用 DAM Filescan102X 处理，在分析昼夜参数时总结为 15 分钟和 30 分钟的 bin，或在分析睡眠/休息参数时将 1到 5分钟的 bins。 目前，五分钟连续不活动是德罗索菲拉睡眠/休息的标准定义。