Encyclopedia of Experiments: Biology
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- ड्रोसोफिला गतिविधि मॉनिटर, या बांध, केंद्रित गतिविधि ट्यूबों को एक छोर पर फ्लाई फूड से लैस करता है और दूसरे पर एक हवा-पारमीयोग्य करीब है। यह सेटअप कई दिनों या हफ्तों तक चलने वाले प्रयोगों के दौरान एकल मक्खियों को समायोजित करता है।
बांध को निर्धारित तापमान, आर्द्रता और प्रकाश चक्र के साथ इनक्यूबेटर जैसे नियंत्रित वातावरण में रखें। एक अंधेरे कमरे में प्रयोग करें और यदि आवश्यक हो, तो डिवाइस को संभालने के लिए एक अवरक्त प्रकाश स्रोत का उपयोग करें, जो उज्ज्वल प्रकाश के विपरीत, फ्लाई के सर्कैडियन सिस्टम को प्रभावित नहीं करता है।
लोकोमोटर गतिविधि को रिकॉर्ड करने के लिए, उपकरण को एक कंप्यूटर सिस्टम से कनेक्ट करें जो डैम के डिटेक्टरों से रीडिंग स्टोर करता है। DAM के इलेक्ट्रॉनिक्स लगातार एक अवरक्त बीम की अखंडता का पता लगाते हैं जो प्रत्येक ट्यूब के मध्य बिंदु के माध्यम से उत्सर्जित होता है और समय-समय पर कंप्यूटर सिस्टम पर डेटा अपलोड करता है।
जैसे ही मक्खी ट्यूब के अंदर आगे-पीछे चलती है, यह अवरक्त बीम को पार करती है । इन रुकावटों को प्रत्येक ट्यूब के लिए समय के साथ बांध द्वारा गिना जाता है और फ्लाई गतिविधि के उपाय के रूप में काम करता है ।
निम्नलिखित प्रोटोकॉल में, हम ड्रोसोफिला वयस्क पुरुषों में सर्कैडियन लय का अध्ययन करने के लिए बांध प्रणाली का उपयोग करेंगे।
- गतिविधि ट्यूबों में मक्खियों को लोड करने से पहले, इनक्यूबेटर को चालू करें जिसका उपयोग गतिविधि मॉनिटर घर में करने के लिए किया जाएगा। वांछित प्रायोगिक डिजाइन के अनुसार इनक्यूबेटर नियंत्रण का उपयोग करके तापमान को समायोजित करें और डैम सिस्टम लाइट कंट्रोलर या इनक्यूबेटर के अपने प्रकाश नियंत्रण प्रणाली का उपयोग करके प्रकाश/अंधेरे शासन को सेट करें।
इसके बाद, कार्बन डाइऑक्साइड के साथ मक्खियों को एनेस्थेटाइज करें। फिर, एक बारीक तूलिका का उपयोग करके, धीरे-धीरे एक फ्लाई को एक गतिविधि ट्यूब में स्थानांतरित करें। धागे के एक टुकड़े के बीच को पकड़ो जो ठीक संदंश के साथ लगभग आधा इंच है और यार्न को खोलने को प्लग करने और प्रयोग के दौरान उड़ान भरने से रोकने के लिए गतिविधि ट्यूब के गैर-खाद्य छोर में डालें, जबकि एक ही समय में ट्यूब में एयरफ्लो की अनुमति देता है।
ट्यूब को अपनी तरफ तब तक रखें जब तक फ्लाई को भोजन में फंसने से रोकने के लिए जागता है। ट्यूबों को गतिविधि मॉनिटर में डालें। ट्राइकिनेटिक्स मॉनिटर के नए, अधिक कॉम्पैक्ट मॉडल के साथ, यह सुनिश्चित करने के लिए रबर बैंड के साथ ट्यूबों को पकड़ना आवश्यक है कि अवरक्त बीम केंद्र की स्थिति में ट्यूब से गुजरता है।
अंत में, गतिविधि पर नज़र रखता है इनक्यूबेटर में डाल दिया और उन्हें टेलीफोन तारों के माध्यम से डेटा संग्रह प्रणाली तक हुक । जांच, बांध प्रणाली संग्रह सॉफ्टवेयर का उपयोग कर, कि सभी पर नज़र रखता है ठीक से झुका रहे हैं, और है कि डेटा उनमें से प्रत्येक से एकत्र किया जा रहा है ।
अब जब मक्खियों को एक्टिविटी ट्यूबों में लोड किया गया है और लोकोमोटर एक्टिविटी मॉनिटरिंग सिस्टम तैयार है, तो अब डेटा रिकॉर्ड किया जा सकता है । मक्खियों को वांछित प्रकाश/अंधेरे, या एलडी, और तापमान शासन को दो से पांच पूरे दिनों के लिए उजागर करके समकालिक और प्रशिक्षित किया जाता है । सबसे अधिक इस्तेमाल किया entrainment स्थिति 25 डिग्री सेल्सियस पर 12 घंटे प्रकाश/12 घंटे अंधेरे का एक प्रकाश/अंधेरा चक्र है ।
इस प्रोटोकॉल के सापेक्ष सर्कैडियन लय के अध्ययन के लिए, जिस समय इनक्यूबेटर में रोशनी चल रही है, उसे zeitgeber समय 0 के रूप में परिभाषित किया गया है और अन्य सभी समय उस मूल्य के सापेक्ष हैं । मानक 12:12 एलडी शर्तों के तहत, जंगली प्रकार ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर आम तौर पर गतिविधि के दो मुकाबलों का प्रदर्शन करते हैं; एक ZT0 के आसपास केंद्रित, सुबह पीक कहा जाता है, और एक और ZT12 के आसपास, शाम को चोटी ।
एनट्रेनिंग अवधि के बाद लगातार अंधेरे और तापमान की स्थिति के तहत फ्री-रनिंग लोकोमोटर गतिविधि लय को मापा जाता है। एलडी के अंतिम दिन अंधेरे चरण में कभी भी प्रकाश चक्र के लिए सेटिंग को बदला जा सकता है, जैसे कि प्रयोग के बाद का दिन डीडी के पहले दिन का प्रतिनिधित्व करता है। DD डेटा संग्रह के सात दिन सर्कैडियन अवधि और आयाम या मक्खियों की लय की ताकत की गणना करने के लिए पर्याप्त है।
सामान्य तौर पर, किसी विशेष जीनोटाइप के लिए विश्वसनीय मुक्त-रनिंग अवधि प्राप्त करने के लिए कम से कम 16 मक्खियों का नमूना आकार आवश्यक है। प्रयोग के समापन पर, बांध प्रणाली सॉफ्टवेयर का उपयोग करके एकत्र किए गए कच्चे बाइनरी डेटा को पोर्टेबल डेटा स्टोरेज डिवाइस पर डाउनलोड किया जाता है, उदाहरण के लिए, यूएसबी कुंजी।
कच्चे बाइनरी डेटा को DAM Filescan102X का उपयोग करके संसाधित किया जाता है, और नींद/बाकी मापदंडों का विश्लेषण करते समय सर्कैडियन मापदंडों का विश्लेषण करते समय 15 और 30 मिनट के डिब्बे में अभिव्यक्त किया जाता है । वर्तमान में, निष्क्रियता के पांच समीपस्थ मिनट ड्रोसोफिला में नींद/आराम की मानक परिभाषा है ।
