ショウジョウバエ アクティビティモニタ(DAM):ハエのロコモド活動を測定する方法

- ショウジョウバエ活動モニター(DAM)は、フライフードを一方の端に装備し、もう一方の端に空気透過性を備えた中央アクティビティチューブを保持しています。

ダムは、温度、湿度、および光サイクルが設定されたインキュベーターのような制御された環境に置きます。

運動活動を記録するには、ダムの検出器からの測定値を格納するコンピュータシステムに装置を接続します。DAMの電子機器は、各チューブの中点を通って放出される赤外線ビームの完全性を継続的に検出し、定期的にコンピュータシステムにデータをアップロードします。

フライがチューブ内を行ったり来たりすると、赤外線ビームを横切ります。これらの中断は各チューブの時間の経過とともにDAMによってカウントされ、フライ活動の尺度として機能します。

次のプロトコルでは、ダムシステムを用いてショウジョウバエ成人男性の概日リズムを研究します。

- ハエを活動管に積み込む前に、活動モニターを収容するために使用されるインキュベーターをオンにします。必要な実験計画に従って、インキュベーターコントロールを使用して温度を調整し、DAMシステムライトコントローラまたはインキュベーター独自のライトコントロールシステムを使用して明暗のレジームを設定します。

次に、二酸化炭素でハエを麻酔します。次に、細かい絵筆を使って、1つのハエをアクティビティチューブにそっと移します。

ハエが目覚めるまでチューブを横に置いて、ハエが食べ物にくっつくのを防ぎます。アクティビティモニタにチューブを挿入します。

最後に、アクティビティモニタをインキュベーターに入れ、電話線を介してデータ収集システムに接続します。

ハエが活動管に積み込まれ、運動活動監視システムの準備が整ったので、データを記録できるようになりました。ハエは希望の光/暗いLD、そして2〜5日間の温度レジームにさらすことによって同期され、緊張します。

このプロトコルに対する概日リズムの研究では、インキュベーターでライトが点灯する時間はツァイトゲバー時間0と定義され、他のすべての時間はその値に対して定義されます。

自由走行の運動活動リズムは、訓練期間後の一定の暗さと温度条件下で測定されます。光サイクルの設定は、LDの最終日の暗い段階でいつでも変更することができ、実験の次の日はDDの初日を表します。

一般に、特定の遺伝子型に対して信頼性の高いフリーランニング期間を得るためには、少なくとも16ハエのサンプルサイズが必要です。

生のバイナリデータはDAM Filescan102Xを使用して処理され、概日パラメータを分析する際には15分と30分のビン、または睡眠/休息パラメータを分析する場合は1〜5分のビンに合計されます。