Dissecção do Midgut de uma mosca adulta: um método para isolar o trato digestivo

- Para começar, remova a cabeça de uma mosca adulta anestesiada. Cubra a mosca decapitada com uma solução contendo soro tampão-de-fosfato, ou PBS, e Bovine Serum Albumin, ou BSA, para evitar a dessecação. Segure a mosca pelo tórax com fórceps, e depois puxe o abdômen com um segundo par de fórceps para expor o intestino.

Uma vez destacado, puxe a cultura para longe do abdômen para desdobrar o intestino. Retire a extremidade posterior da mosca para começar a liberar o intestino da cavidade abdominal. Continue puxando o intestino para puxar todo o tecido para fora do abdômen. Uma vez liberado, remova o foregut, as tubulações malpighianas, o hindgut e os ovários para deixar para trás apenas o midgut dissecado, o local primário de digestão dentro da mosca.

No protocolo de exemplo, dissecaremos midguts de moscas jovens e idosos para serem analisados ainda mais via Fluorescence-Activated Cell Sorting, ou FACS.

- Antes de iniciar a dissecção, anestesiar um frasco de 40 moscas com dióxido de carbono em um leito de mosca padrão. Em seguida, use uma lâmina de barbear para decapitar todas as moscas e transferi-las para um prato de dissecção revestido com gel de agarose. Despeje PBS frio suficiente mais BSA no prato para cobrir a agarose.

Então, para cada inseto, por sua vez, pegue um abdômen de mosca com um par de fórceps, e o tórax com outro.

Em seguida, use um dos fórceps para pegar a extremidade posterior do abdômen, e o outro para agarrar a borda da cutícula anteriormente aberta. Puxe a extremidade posterior para quebrar a cutícula, e continue puxando posteriormente muito suavemente, até que todo o intestino tenha sido retirado da cavidade abdominal.

Como os midguts são isolados, use uma pipeta Pasteur de vidro para transferir periodicamente vários tecidos intestinais de cada vez para um tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitro contendo PBS frio mais BSA no gelo.