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Disección del Midgut de una mosca adulta

 
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Disección del Midgut de una mosca adulta: un método para aislar el tracto digestivo

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- Para empezar, retire la cabeza de una mosca adulta anestesiada. Cubra la mosca decapitada con una solución que contenga solución que contenga solución salina amortiguada por fosfato, o PBS, y albúmina sérica bovina, o BSA, para evitar la desecación.

Una vez desprendido, tire del cultivo lejos del abdomen para desplegar el intestino. Tire del extremo posterior de la mosca para comenzar a liberar el intestino de la cavidad abdominal.

En el protocolo de ejemplo, diseccionaremos midguts de moscas adultas jóvenes y viejas para ser analizados más a través de la clasificación celular activada por fluorescencia, o FACS.

- Antes de comenzar la disección, anestesia un vial de 40 moscas con dióxido de carbono en un lecho de mosca estándar.

Luego, por cada insecto, a su vez, agarrar un abdomen de mosca con un par de fórceps, y el tórax con otro. Separar el tórax del abdomen.

A continuación, utilice uno de los fórceps para agarrar el extremo posterior del abdomen, y el otro para agarrar el borde de la cutícula anteriormente abierta. Tire del extremo posterior para romper la cutícula, y continúe tirando posteriormente muy suavemente, hasta que todo el intestino haya sido sacado de la cavidad abdominal.

Como los midguts están aislados, utilice una pipeta pasteur de vidrio para transferir periódicamente varios de los tejidos intestinales a la vez a un tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitros que contiene PBS frío más BSA en hielo.

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