Enriquecedor para machos: mantendo um estoque de machos C. elegans

- C. elegans ocorrem em dois sexos: hermafroditas, que têm dois cromossomos X, e machos, que têm apenas um cromossomo X referido como XO ou X nulo.

Hermafroditas produzem oócitos e espermatozoides e podem se reproduzir por auto-fertilização. Quase todos os seus gametas carregam um cromossomo X, de modo que os descendentes que resultam da auto-fertilização são principalmente hermafroditas.

Raramente, o cromossomo X é perdido durante a gametogênese, resultando em descendentes masculinos apenas cerca de 0,1 a 0,2% do tempo. Esta não é uma maneira prática de coletar machos suficientes para qualquer experimento ou cruz genética que precisamos deles.

Em vez disso, podemos fazer uma hermafrodita com um macho resultando em cerca de metade da prole sendo macho. Ao realizar esta cruz genética, certifique-se de incluir mais machos do que hermafroditas para garantir um acasalamento eficiente. No exemplo a seguir, vamos configurar uma placa de acasalamento e isolar vermes machos em preparação para coletar e estudar espermatóides in vitro.

- Primeiro, obtenha um grande número de machos cruzando cinco machos selvagens e um hermafrodita em um pequeno gramado de bactérias E. coli OP50 semeadas no centro de um meio de crescimento nematode ou placa de NGM. Cerca de 50% da próxima geração serão machos selvagens.

Para coletar machos de estágio L4, examine o estágio de desenvolvimento e a morfologia da cauda sob um microscópio dissecando. Um verme de estágio L4 é colhido com base na morfologia da cauda.

Usando um fio de platina, escolha machos de 7 a 10 estágioS L4 por experimento e transfira-os para placas NGM semeadas com OP50 e deixe-os crescer por um dia ou dois. O crescimento de machos celibatários na ausência de hermafroditas previne a perda de espermatozoides e, portanto, um grande número de espermatozoides estará disponível durante o procedimento experimental.