Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- C. elegans встречаются у двух полов: гермафродиты, которые имеют две Х-хромосомы, и самцы, которые имеют только одну Х-хромосому, именуемую XO или X null.
Гермафродиты производят как ооциты, так и сперму и могут размножаться путем самоудобрения. Почти все их геймеры несут Х-хромосому, поэтому потомство, которое является результатом самоудобрения, в основном гермафродиты.
Редко Х-хромосома теряется во время gametogenesis, в результате чего мужское потомство только около 0,1 до 0,2% времени. Это не практический способ собрать достаточное количество мужчин для любого эксперимента или генетического креста, что мы нуждаемся в них.
Вместо этого, мы можем сделать гермафродит с самцом в результате чего около половины потомства быть мужчиной. При проведении этого генетического креста, не забудьте включить больше мужчин, чем гермафродитов для обеспечения эффективного спаривания. В следующем примере, мы будем созданы спаривания пластины и изолировать мужчин червей в рамках подготовки к сбору и изучению сперматозоидов в пробирке.
- Во-первых, получить большое количество самцов, пересекая пять самцов дикого типа и один гермафродит на небольшой лужайке бактерий E. coli OP50, посеянных в центре среды роста нематод или NGM пластины. Примерно 50% следующего поколения будут самцами дикого типа.
Для сбора L4 стадии самцов, изучить стадии развития и хвост морфологии под рассечением микроскопа. L4 этап червь собирается на основе хвоста морфологии.
Используя платиновую проволоку, выберите от 7 до 10 L4 этапе мужчин за эксперимент и передать их NGM пластины посеяны с OP50 и пусть они растут в течение дня или двух. Растущие безбрачия мужчин в отсутствие гермафродитов предотвращает потерю спермы и, таким образом, большое количество сперматозоидов будут доступны во время экспериментальной процедуры.
