Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- For å måle den gjennomsnittlige levetiden til en nematodepopulasjon, start med utviklingssynkroniserte L1 larver i M9-buffer. Bestem larvenes tetthet, og legg deretter 50 til hver tallerken. Forbered minst tre repliker plater per tilstand, samt reserveplater.
La disse ormene utvikle seg normalt til de når L4-stadiet. Nå kan du legge FUdR til platene, noe som forhindrer ormene i å produsere avkom. Alternativt må du flytte ormene til nye plater hver dag etter telling, for å sikre at du bare måler levetiden til en enkelt generasjon.
Deretter fjerner du alle menn. Dette vil fjerne variablene av sex og parring fra eksperimentet. Neste dag teller du antall levende ormer på tallerkenen ved å lete etter spontan bevegelse eller respons på mild berøring. Fjern eventuelle døde ormer og registrer tallene. Tell overlevende ormer daglig til ingen gjenstår. I eksempelprotokollen vil vi se en demonstrasjon av en levetidsanalyse.
- Last de tilberedte bakteriefrøplatene med 50 L1 dyr hver. Sett opp platene i en 20 grader Celsius inkubator til embryoene utvikler seg til L4-scenen. Normal utvikling fra L1 til L4 tar ca 40 timer.
Deretter, for å forhindre avkomproduksjon, tilsett 160 mikroliter 50x FUdR til hver plate. Fjern deretter hannene, da levetiden vanligvis bare måles med hermafroditter. Når du er ferdig, pakk platene inn i 20 grader Celsius inkubator.
Inntil alle ormene er døde, skår deres levedyktighet på daglig basis. For å gjøre det, berør forsiktig hver ikke-bevegelig nematode på hodet med en platinatråd eller øyenvippe. Ikke-reaktive dyr er døde og må fjernes fra platen. Legg merke til eventuelle uregelmessigheter under denne rutinen.
