Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Nematod popülasyonunun ortalama ömrünü ölçmek için, M9 tamponunda gelişimsel olarak senkronize edilmiş L1 larvaları ile başlayın. Larvaların yoğunluğunu belirleyin, ardından her tabağa 50 ekleyin. Durum başına en az üç çoğaltma plakası ve yedekleme plakaları hazırlayın.
Bu solucanların L4 aşamasına ulaşana kadar normal şekilde gelişmesine izin verin. Şimdi plakalara FUdR ekleyebilirsiniz, bu da solucanların soy üretmesini önleyecektir. Alternatif olarak, solucanları her gün saydıktan sonra yeni plakalara taşımanız gerekir, sadece tek bir neslin ömrünü ölçtüğünden emin olmak için.
Sonra, herhangi bir erkeği çıkarın. Bu, seks ve çiftleşme değişkenlerini deneyden kaldıracaktır. Ertesi gün, spontan hareket veya yumuşak dokunuşa yanıt arayarak plakadaki canlı solucanların sayısını sayın. Ölü solucanları çıkarın ve sayıları kaydedin. Hiçbiri kalmayana kadar hayatta kalan solucanları günlük olarak sayın. Örnek protokolde, bir ömür tahlilinin bir gösterimini göreceğiz.
- Hazırlanan bakteri tohumlu plakaları her biri 50 L1 hayvanla yükleyin. Embriyolar L4 aşamasına gelene kadar plakaları 20 santigrat derecelik bir inkübatöre kurun. L1'den L4'e normal gelişim yaklaşık 40 saat sürer.
Daha sonra, soy üretimini önlemek için, her tabağa 160 mikrolitre 50x FUdR ekleyin. Sonra erkekleri çıkarın, çünkü ömür tipik olarak sadece hermafroditlerle ölçülür. Tamamlandığında, plakaları 20 santigrat derece inkübatöre yeniden paketleyin.
Tüm solucanlar ölene kadar, canlılıklarını günlük olarak puanlayın. Bunu yapmak için, hareket etmeyen her nematodun kafasına bir platin tel veya kirpikle hafifçe dokunun. Reaktif olmayan hayvanlar öldü ve plakadan çıkarılmalıdır. Bu rutin sırasında herhangi bir anormalliğe dikkat edin.
