Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Commencez par préparer le composé à être testé pour la toxicité, et distribuez-le aux puits d’une plaque d’essai. Transférez les vers du stade de développement approprié à chaque puits, et démarrez immédiatement une mise à jour. Notez tous les vers qui sont endommagés et ne les incluez pas dans vos calculs de survie.
Après un temps prédéterminé, compter le nombre de vers qui sont encore vivants dans chaque puits. La lumière vive d’un microscope de dissection ou d’un léger tapage sur la plaque devrait faire bouger tous les vers vivants. Répétez cette observation après chaque intervalle de temps, jusqu’à ce que la plupart des animaux soient morts. Dans le protocole suivant, nous observerons le temps de survie des larves L4 pendant l’exposition au paraquat, un composé qui induit un stress oxydatif.
- Dans cette démonstration, le stress oxydatif sera induit à l’aide du paraquat. Préparez une nouvelle solution de paraquat de 100 millimlaires telle que décrite dans le texte du protocole qui l’accompagne. Le paraquat est un composé dangereux et hautement toxique, et doit être manipulé selon les lignes directrices appropriées.
Pipette 40 microlitres de la solution paraquat à chaque puits d’une plaque de 96 puits. Utilisez au moins 12 puits comme répliques de toutes les conditions testées. À l’aide d’un pic de ver fil de platine, transférez cinq à huit larves de L4 dans chaque puits.
Indiquez l’heure de départ et l’heure de fin pour chaque condition testée. Placez la plaque de 96 puits à 20 degrés Celsius. Une heure après l’heure de départ, marquez les animaux morts et vivants à l’aide d’un microscope disséquant. Secouez doucement la plaque avant de commencer à compter.
Les vers qui ne bougent pas même après avoirper une lumière de haute intensité sont marqués comme morts. Regardez la forme du ver, les queues et le mouvement de la tête à grossissement élevé pour distinguer les vers morts des vers vivants. Score survie toutes les heures jusqu’à ce que la plupart des vers sont morts, et répéter cet essai au moins trois fois indépendantes.
Pour déterminer le pourcentage de survie pour chaque point de temps, calculez d’abord le nombre total d’animaux par condition en ajoutant le nombre total d’animaux transférés à chaque puits. Ignorer les animaux qui ont été endommagés ou tués lors du transfert. Ensuite, pour chaque point de temps, calculer le nombre total d’animaux morts par condition. Calculer le pourcentage de décès et le pourcentage de survie.
