Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Beginnen Sie mit der Vorbereitung der Verbindung auf Toxizität getestet werden, und verteilen Sie es auf die Brunnen einer Assay-Platte. Übertragen Sie Würmer der entsprechenden Entwicklungsstufe zu jedem Brunnen, und sofort starten Sie einen Timer. Beachten Sie alle Würmer, die beschädigt sind und nicht in Ihre Überlebensberechnungen einbeziehen.
Nach einer vorgegebenen Zeit zählen Sie die Anzahl der Würmer, die in jedem Brunnen noch am Leben sind. Das helle Licht eines Seziermikroskops oder sanftes Klopfen auf der Platte sollte dazu führen, dass sich lebende Würmer bewegen. Wiederholen Sie diese Beobachtung nach jedem Zeitintervall, bis die meisten Tiere tot sind. Im folgenden Protokoll werden wir die Überlebenszeit von L4-Larven während der Exposition gegenüber Paraquat beobachten, einer Verbindung, die oxidativen Stress induziert.
- In diesem Demo wird oxidativer Stress mit Paraquat induziert. Bereiten Sie eine frische 100 Millimolar-Paraquat-Lösung vor, wie im begleitenden Protokolltext beschrieben. Paraquat ist eine gefährliche und hochgiftige Verbindung und muss nach geeigneten Richtlinien behandelt werden.
Pipette 40 Mikroliter der Paraquatlösung für jeden Brunnen einer 96-Well-Platte. Verwenden Sie mindestens 12 Bohrungen als Nachbildungen aller getesteten Bedingungen. Mit einem Platindraht-Wurmpick, übertragen Sie fünf bis acht L4-Larventiere auf jeden Brunnen.
Geben Sie die Startzeit und die Endzeit für jeden getesteten Zustand an. Platzieren Sie die 96-Well-Platte bei 20 Grad Celsius. Eine Stunde nach der Startzeit punkten Sie tote und lebende Tiere mit einem Sezierendes Mikroskop. Schütteln Sie die Platte vorsichtig, bevor Sie anfangen zu zählen.
Würmer, die sich auch nach dem Erkennen eines hochintensiven Lichts nicht bewegen, werden als tot bewertet. Betrachten Sie Wurmform, Schwänze und Kopfbewegung bei hoher Vergrößerung, um tote Würmer von lebenden Würmern zu unterscheiden. Erzielen Sie das Überleben jede Stunde, bis die meisten Würmer tot sind, und wiederholen Sie diesen Test mindestens dreimal.
Um den Überlebensprozentsatz für jeden Zeitpunkt zu bestimmen, berechnen Sie zuerst die Gesamtzahl der Tiere pro Zustand, indem Sie die Gesamtzahl der Tiere addieren, die auf jeden Brunnen übertragen wurden. Ignorieren Sie die Tiere, die bei der Übertragung beschädigt oder getötet wurden. Als nächstes berechnen Sie für jeden Zeitpunkt die Gesamtzahl der toten Tiere pro Zustand. Berechnen Sie den Prozentsatz des Todes und den Prozentsatz des Überlebens.
