Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Begynn med å forberede forbindelsen som skal testes for toksisitet, og fordel den til brønnene på en analyseplate. Overfør ormer av riktig utviklingsstadium til hver brønn, og start umiddelbart en timer. Legg merke til eventuelle ormer som er skadet og ikke inkluder dem i overlevelsesberegningene dine.
Etter en forhåndsbestemt tid, tell antall ormer som fortsatt er i live i hver brønn. Det sterke lyset fra et disseksjonsmikroskop eller forsiktig tapping på platen skal føre til at levende ormer beveger seg. Gjenta denne observasjonen etter hvert tidsintervall, til de fleste dyrene er døde. I følgende protokoll vil vi observere L4 larver overlevelsestid under eksponering for paraquat, en forbindelse som induserer oksidativt stress.
- I denne demonstrasjonen vil oksidativt stress bli indusert ved hjelp av paraquat. Forbered en frisk 100 millimolar paraquat-løsning som beskrevet i den medfølgende protokollteksten. Paraquat er en farlig og svært giftig forbindelse, og må håndteres i henhold til passende retningslinjer.
Pipette 40 mikroliter av paraquat-løsningen til hver brønn av en 96-brønnsplate. Bruk minst 12 brønner som replikeringer av alle tilstander som testes. Bruk en platinatrådormplukk, overfør fem til åtte L4 larver dyr til hver brønn.
Angi starttid og sluttid for hver tilstand som testes. Plasser 96-brønnsplaten ved 20 grader Celsius. En time etter starttidspunktet scorer du døde og levende dyr ved hjelp av et dissekerende mikroskop. Rist platen forsiktig før du begynner å telle.
Ormer som ikke beveger seg selv etter å ha sett et høyintensitetslys, skåres som døde. Se på ormform, haler og hodebevegelse ved høy forstørrelse for å skille døde ormer fra levende ormer. Score overlevelse hver time til de fleste ormer er døde, og gjenta denne analysen minst tre uavhengige ganger.
For å bestemme overlevelsesprosenten for hvert tidspunkt, må du først beregne totalt antall dyr per tilstand ved å legge til totalt antall dyr som overføres til hver brønn. Ignorer dyrene som ble skadet eller drept ved overføring. Deretter beregner du det totale antallet døde dyr per tilstand for hvert tidspunkt.
