Test de ponte : une méthode pour quantifier le comportement de ponte de C. elegans

- Des expériences de quantification de la ponte ont révélé les composants neurologiques et les indices environnementaux qui ont un impact sur ce comportement. Les changements dans le comportement de ponte peuvent indiquer des effets toxiques sur les systèmes neuromusculaires ou reproducteurs.

Pour vérifier la toxicité, augmenter les œufs synchronisés sur le plan du développement sur les plaques de croissance des nématodes avec et sans le composé d’intérêt. Ces expériences utilisent des aliments bactériens tués par la chaleur pour empêcher les bactéries de métaboliser le composé. Permettre à cette génération de croître jusqu’à ce qu’ils deviennent de jeunes adultes.

Déplacez ensuite les vers sur de nouvelles plaques dans les conditions appropriées de contrôle ou d’expérimentation, et laissez-les pondre pendant 24 heures. Chaque jour, transférez les adultes dans une nouvelle assiette et comptez les œufs sur la plaque précédente. Continuez jusqu’à ce que les adultes cessent de pondre, environ cinq jours pour les vers sauvages. Calculer le nombre d’œufs pondus par ver adulte chaque jour, et additionnent le total à la fin de l’expérience.

Dans le protocole d’exemple, nous utiliserons l’essai de ponte de C. elegans pour tester l’etoposide -- un médicament de chimiothérapie -- pour la toxicité reproductrice.

- Incuber les œufs synchronisés par âge sur la plaque NGM contenant du DMSO ou de l’oposide à 20 degrés Celsius pendant 64 heures, jusqu’au stade du jeune adulte. Transférer cinq vers adultes vers de nouvelles plaques NGM sans produits chimiques ni nouvelles plaques NGM contenant le même prétraitement chimique, et les incuber pendant 24 heures.

Transférez les adultes dans de nouvelles plaques NGM, comme nous venons de le démontrer, et comptez le nombre d’œufs chaque jour. En outre, comptez les vers qui ont rampé, sont morts ou ont été éclos à l’interne. Effectuer des calculs selon le protocole du texte.