Egg Laying Assay: Eine Methode zur Quantifizierung des Ei-Laying-Verhaltens von C. elegans

- Experimente zur Quantifizierung der Eiablage haben die neurologischen Komponenten und Umwelthinweise aufgedeckt, die dieses Verhalten beeinflussen. Veränderungen im Eiablageverhalten können auf toxische Auswirkungen auf das neuromuskuläre oder reproduktive System hinweisen.

Um auf Toxizität zu testen, heben Sie entwicklungssynchrone Eier auf Nematoden-Wachstumsmedienplatten mit und ohne die Verbindung von Interesse. Diese Experimente verwenden wärmeabgetötete bakterielle Wurmnahrung, um zu verhindern, dass die Bakterien die Verbindung verstoffwechseln. Lassen Sie diese Generation wachsen, bis sie junge Erwachsene werden.

Dann bewegen Würmer auf neue Teller unter den entsprechenden Kontroll- oder Versuchsbedingungen, und lassen Sie sie Eier für 24 Stunden legen. Jeden Tag, übertragen Sie die Erwachsenen auf eine neue Platte, und zählen Sie die Eier auf dem vorherigen Teller. Weiter, bis die Erwachsenen aufhören zu legen, etwa fünf Tage für Wild-Wurm. Berechnen Sie die Anzahl der Eier pro erwachsenen Wurm jeden Tag gelegt, und addieren Sie die Summe am Ende des Experiments.

Im Beispielprotokoll werden wir den C. elegans Eilegen-Assay verwenden, um Etoposid -- ein Chemotherapie-Medikament - auf Reproduktionstoxizität zu testen.

- Die alterssynchronisierten Eier auf der NGM-Platte, die DMSO oder Etoposid bei 20 Grad Celsius enthält, 64 Stunden lang bis zum jungen Erwachsenenstadium inkubieren. Übertragen Sie fünf erwachsene Würmer ohne Chemikalien oder neue NGM-Platten, die die gleiche chemische Vorbehandlung enthalten, auf neue NGM-Platten und inkubieren Sie sie 24 Stunden lang.

Übertragen Sie die Erwachsenen auf neue NGM-Platten, wie gerade gezeigt, und zählen Sie die Anzahl der Eier jeden Tag. Darüber hinaus zählen Sie die Würmer, die abkrochen, starben, oder wurden intern geschlüpft. Führen Sie Berechnungen nach dem Textprotokoll.