Saggio di deposizione delle uova: un metodo per quantificare il comportamento di deposizione delle uova di C. elegans

- Esperimenti per quantificare la deposizione delle uova hanno rivelato i componenti neurologici e gli spunti ambientali che hanno un impatto su questo comportamento. I cambiamenti nel comportamento di deposizione delle uova possono indicare effetti tossici sul sistema neuromuscolare o riproduttivo.

Per verificare la tossicità, aumentare le uova sincronizzate con lo sviluppo su piastre mediali di crescita del nematode con e senza il composto di interesse. Questi esperimenti utilizzano alimenti per vermi batterici uccisi dal calore per impedire ai batteri di metabolizzare il composto. Consentire a questa generazione di crescere fino a diventare giovani adulti.

Quindi spostare i vermi su nuove piastre nelle condizioni di controllo o sperimentali appropriate e lasciarli deporre le uova per 24 ore. Ogni giorno trasferire gli adulti su un nuovo piatto e contare le uova sul piatto precedente. Continuare fino a quando gli adulti non smettono di deporre, circa cinque giorni per i vermi di tipo selvatico. Calcolare il numero di uova deposte ogni giorno per verme adulto e sommare il totale alla fine dell'esperimento.

Nel protocollo di esempio, useremo il saggio di deposizione delle uova C. elegans per testare l'etoposide, un farmaco chemioterapico, per la tossicità riproduttiva.

- Incubare le uova sincronizzate con l'età sulla piastra NGM contenente DMSO o etoposide a 20 gradi Celsius per 64 ore, fino allo stadio del giovane adulto. Trasferire cinque vermi adulti in nuove piastre NGM senza sostanze chimiche o nuove piastre NGM contenenti lo stesso pretrattamento chimico e incubarle per 24 ore.

Trasferire gli adulti in nuove piastre NGM, come appena dimostrato, e contare il numero di uova ogni giorno. Inoltre, contare i vermi strisciati fuori, morti o nati internamente. Eseguire calcoli in base al protocollo di testo.