C.エレガンス 芽球体解剖:卵殻を除去し、胚細胞を解離する方法

- この解剖には、卵とほぼ同じ幅の開口部と2倍の幅の開口部を持つ1つと、それらの間の迅速な移動を容易にするために井戸に整理された一連のソリューションの2つのマイクロピペットを使用してください。

まず、成体の雌雄同体を卵塩溶液に入れ、オスモスティックバランスで胚が破裂するのを防ぎ、ワームを半分に切って発達中の胚を放出する。

次に、2細胞の胚を特定する。これらの細胞は受精卵の分裂によって形成された胚形である。より大きな開口部を持つマイクロピペットを使用して、胚を次亜塩素酸溶液、漂白剤に移し、保護卵殻を分解し始める。

わずか40〜55秒後に、胚をシェルトンの成長培地に移すか、SGMを2つのウェルで短く洗い、漂白剤のすべての痕跡を取り除き、3番目の井戸に入れます。

さて、卵殻を取り除き、ブラストミアを露出させる機械的な力を提供する胚を繰り返しピペットするために小さなマイクロピペットを使用してください。

-マイクロキャピラリーの両端を右手と左手で10マイクロリットルの容量で保持します。両端にマイクロキャピラリーを引っ張って緊張を加え、キャピラリーの中心をバーナーの上に持って2本の手で引っ張った毛細血管を作ります。

解剖顕微鏡の下で、手で引っ張られた毛細血管の先端を鉗子でトリミングします。2つの先端の開口部サイズを、胚移植と卵殻除去のためのC.エレガンス胚の短い軸の長さをそれぞれ約2倍と1倍にします。

引っ張られた毛細管を口のピペット装置に取り付けます。ピペット45マイクロリットルの卵塩溶液をマルチウェルスライドの井戸に取り付けます。

5~10匹の成人C.エレガンスを井戸の上に置き、初期のC.エレガンス胚を得るために、C.エレガンスの体の左右に2本の針を置き、針を互いに滑らせて大人を粉々に切る。

卵塩溶液を含む井戸の隣の井戸に45マイクロリットルの次亜塩素酸塩溶液のピペット45マイクロリットル、その後の3つの井戸にシェルトンの成長培地のピペット45マイクロリットル。1細胞段階および初期の2細胞段階胚を口腔ピペットによって次コリン酸溶液に移し、40〜55秒待ちます。

最初の2つの井戸のそれぞれで1〜2秒のシェルトンの成長培地で次の3つの井戸に移して胚を洗います。

その後、手描きの毛細管を持つピペットを連続的にピペットで2細胞期胚芽胞体を分離する。

- 卵殻除去後、破裂を防ぐために胚を上下にピペット化する力を最小限に抑えます。