Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- لهذا التشريح، استخدم اثنين من micropipettes: واحد مع فتح ما يقرب من نفس عرض بيضة واحدة التي هي ضعف واسعة، وسلسلة من الحلول المنظمة في الآبار لتسهيل النقل السريع بينهما.
أولا، ضع هيرمافروديت البالغين في محلول ملح البويضة، وهو متوازن بشكل نضحي لمنع الأجنة من الانفجار.
ثم، حدد الأجنة المرحلة من خليتين.
بعد 40 إلى 55 ثانية فقط، قم بنقل الجنين إلى وسيط النمو في شيلتون، أو SGM. اغسل كل جنين لفترة وجيزة في بئرين من SGM لإزالة جميع آثار التبييض قبل وضعها في بئر ثالث.
الآن، استخدم micropipette أصغر لمصبوب الجنين مرارا وتكرارا توفير القوة الميكانيكية لإزالة قشر البيض وفضح blastomeres.
- عقد كل نهاية للرأسمالية الصغيرة بسعة 10 ميكرولترات مع اليد اليمنى واليسارية.
تحت المجهر تشريح، تقليم نصائح من الشعيرات الدموية سحبت باليد مع ملقط. جعل اثنين من أحجام فتح تلميح مرتين تقريبا ومرة واحدة على طول المحور القصير من الأجنة C. elegans لنقل الجنين وإزالة قشر البيض، على التوالي.
إرفاق الشعرية سحبت في جهاز ماصة الفم.
ضع 5 إلى 10 أشخاص بالغين من C. elegans على البئر. للحصول على أجنة C. elegans المبكرة ، قم بقطع البالغين إلى قطع عن طريق وضع إبرتين إلى اليمين واليسار من جسم C. elegans وانزلاق الإبر بجانب بعضها البعض.
Pipette 45 ميكرولتر من محلول هيبوكلوريت على بئر بجوار البئر التي تحتوي على محلول ملح البيض، وماصة 45 ميكرولتر من متوسط النمو شيلتون على الآبار الثلاثة اللاحقة. نقل مرحلة خلية واحدة والأجنة مرحلة مبكرة من خليتين في محلول hypochorite من ماصة الفم مع فتح حجم أكبر وانتظر لمدة 40 إلى 55 ثانية.
اغسل الأجنة عن طريق نقلها إلى الآبار الثلاثة التالية مع متوسط نمو شيلتون مع 1 إلى 2 ثانية في كل بئر من البئرين الأولين.
بعد ذلك ، ماصة باستمرار مع الشعيرات الدموية مرسومة باليد لفصل blastomeres الجنينية مرحلة الخلايا اثنين.
- بعد إزالة قشر البيض، وتقليل القوة في الأجنة الأنابيب صعودا وهبوطا لمنع انفجار.
