C. Elegans Blastomere Dissektion: En metode til at fjerne æggeskallen og dissociere embryonale celler

- Til denne dissektion skal du bruge to mikropipetter: en med en åbning omtrent samme bredde som et æg og en, der er dobbelt så bred, og en række løsninger organiseret i brønde for at lette hurtig overførsel mellem dem.

Først skal du placere voksne hermafroditter i æggesaltopløsning, som er osmotisk afbalanceret for at forhindre embryoner i at briste. Skær ormene i halvdelen for at frigive de udviklende embryoner.

Derefter identificere to-celle fase embryoner. Disse celler er blastomerer dannet af opdelingen af det befrugtede æg. Brug mikropipetten med den større åbning for at overføre et foster til hypochloritopløsning, blegemiddel, som vil begynde at nedbryde den beskyttende æggeskal.

Efter kun 40 til 55 sekunder skal du overføre embryoet til Sheltons vækstmedium eller SGM. Vask hvert foster kort i to brønde af SGM for at fjerne alle spor af blegemidlet, før du placerer dem i en tredje brønd.

Brug nu den mindre mikropipette til gentagne gange at pipette embryoet, hvilket giver den mekaniske kraft til at fjerne æggeskallen og udsætte blastomererne.

- Hold hver ende af en mikrocapillary med en kapacitet på 10 mikroliter med højre og venstre hånd.

Under dissekerende mikroskop, trim spidsen af hånd-trak kapillærer med pincet. Gør de to spids åbning størrelser cirka to gange og en gange den korte akse længde C. elegans embryoner til embryo overførsel og æggeskal fjernelse, henholdsvis.

Sæt den trukket kapillær i en mund pipetter apparat. Pipette 45 mikroliter af æggesalt løsning på en brønd af en multi-godt dias.

Placer 5 til 10 voksne C. elegans på brønden. For at opnå tidlige C. elegans embryoner, skære voksne i stykker ved at placere to nåle til højre og venstre for C. elegans krop og skubbe nåle forbi hinanden.

Pipette 45 mikroliter af hypochloritopløsning på en brønd ved siden af den velholdte æggesaltopløsning og pipetter 45 mikroliter af Sheltons vækstmedium over på de efterfølgende tre brønde.

Vask embryonerne ved at overføre dem til de næste tre brønde med Sheltons vækstmedium med 1 til 2 sekunder i hver af de to første brønde. Brug den håndtegnede kapillær med en mindre størrelse åbning, gentag forsigtigt pipetter embryoet til fjernelse af æggeskaller.

Derefter pipetteres kontinuerligt med den håndtegnede kapillær for at adskille de tocellede embryonale blastomerer.

- Efter fjernelse af æggeskallen skal du minimere kraften i at pipettere embryoner op og ned for at forhindre sprængning.