Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

К. Элеганс Бластерное вскрытие

 
Click here for the English version

К. Элеганс Бластерное вскрытие: метод удаления яичной скорлупы и диссоциации эмбриональных клеток

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

- Для этого вскрытия используйте два микропайетта: один с отверстием примерно такой же ширины, как яйцо и один, который в два раза шириной, и ряд решений, организованных в скважинах для облегчения быстрой передачи между ними.

Во-первых, поместите взрослых гермафродитов в раствор яичной соли, который осмотически сбалансирован, чтобы предотвратить разрыв эмбрионов.

Затем определите двухклеточные стадии эмбрионов. Эти клетки являются бластомерами, образованными делением оплодотворенной яйцеклетки. Используйте микропипет с большим отверстием для переноса эмбриона в гипохлоритный раствор, отбеливатель, который начнет ломать защитную яичную скорлупу.

После всего лишь 40 до 55 секунд, передать эмбрион в среде роста Шелтона, или SGM. Вымойте каждый эмбрион кратко в двух скважинах SGM, чтобы удалить все следы отбеливателя, прежде чем поместить их в третью скважину.

Теперь используйте меньший микропипют, чтобы повторно пипетки эмбриона, обеспечивая механическую силу для удаления яичной скорлупы и подвергать бластомеры. Аккуратно продолжать пипетки эмбриона, чтобы отделить отдельные клетки бластомера. В следующем протоколе, мы увидим этот метод в действии.

- Держите каждый конец микрокапильярии на мощность 10 микролитров правой и левой рукой. Потяните микрокапильярию к обоим концам, чтобы применить напряжение и принести центр капилляра над горелкой, чтобы сделать два ручных капилляров.

Под рассечением микроскопа, обрезать кончики ручной вытащил капилляры с типсами. Сделать два кончика размера открытия примерно в два раза и один раз короткая длина оси C. elegans эмбрионов для переноса эмбриона и удаления яичной скорлупы, соответственно.

Прикрепите вытянутый капилляр в рот трубчатый аппарат. Pipette 45 микролитров раствора яичной соли на колодец из нескольких хорошо слайд.

Поместите от 5 до 10 взрослых C. elegans на колодец. Чтобы получить ранние эмбрионы C. elegans, разрезать взрослых на куски, позиционирование двух игл справа и слева от тела C. elegans и скольжения иглы мимо друг друга.

Pipette 45 микролитров гипохлоритового раствора на скважину рядом с колодцом, содержащим раствор яичной соли, и пипетку 45 микролитров среды роста Шелтона на последующие три скважины. Передача одноклеточной стадии и ранних двухклеточных стадий эмбрионов в гипохоритный раствор ртом пипетки с большим размером открытия и ждать от 40 до 55 секунд.

Вымойте эмбрионы, передав их в ближайшие три скважины со средой роста Шелтона с 1 до 2 секунд в каждой из первых двух скважин.

После этого непрерывно пипетка с нарисованным вручную капилляром отделяет двухклеточную стадию эмбриональных бластомер.

- После удаления яичной скорлупы, свести к минимуму силу в трубопроводных эмбрионов вверх и вниз, чтобы предотвратить взрыв.

Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter