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C. elegans Disección blastómero

 
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C. elegans Disección blastómero: un método para eliminar la cáscara de huevo y disociar las células embrionarias

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- Para esta disección, utilice dos micropipettos: uno con una abertura de aproximadamente la misma anchura que un huevo y otro que sea el doble de ancho, y una serie de soluciones organizadas en pozos para facilitar la rápida transferencia entre ellos.

En primer lugar, coloque hermafroditas adultas en solución de sal de huevo, que está osmóticamente equilibrada para evitar que los embriones estallen.

Luego, identificar embriones en etapa de dos células. Estas células son los blastómeros formados por la división del óvulo fertilizado.

Después de sólo 40 a 55 segundos, transfiera el embrión al medio de crecimiento de Shelton, o SGM. Lave cada embrión brevemente en dos pozos de SGM para eliminar todos los rastros de la lejía antes de colocarlos en un tercer pozo.

Ahora, utilice el micropipette más pequeño para canalizar repetidamente el embrión proporcionando la fuerza mecánica para eliminar la cáscara de huevo y exponer los blastómeros.

- Sostenga cada extremo de un microcapilar a una capacidad de 10 microlitros con mano derecha e izquierda. Tire del microcapilar hacia ambos extremos para aplicar tensión y llevar el centro del capilar sobre un quemador para hacer dos capilares tirados a mano.

Bajo el microscopio diseccionador, recorta las puntas de los capilares tirados a mano con fórceps.

Coloque el capilar tirado en un aparato de pipeteo bucal. Pipeta 45 microlitros de solución de sal de huevo en un pozo de un tobogán multi-pozo.

Coloque 5 a 10 C. elegans adultos en el pozo. Para obtener embriones C. elegans tempranos, corte a los adultos en pedazos colocando dos agujas a la derecha e izquierda del cuerpo de C. elegans y deslizando las agujas entre sí.

Pipeta 45 microlitros de solución de hipoclorito en un pozo junto a la solución de sal de huevo que contiene pozo, y pipeta 45 microlitros del medio de crecimiento de Shelton en los tres pozos posteriores.

Lave los embriones transfiriéndolos a los siguientes tres pozos con el medio de crecimiento de Shelton con 1 a 2 segundos en cada uno de los dos primeros pozos.

Después de eso, pipeta continuamente con el capilar dibujado a mano para separar los blastómeros embrionarios de etapa de dos células.

- Después de la extracción de cáscara de huevo, minimice la fuerza en la pipeta de embriones hacia arriba y hacia abajo para evitar la explosión.

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