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Encyclopedia of Experiments: Biology

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酶消化和手动分离:为细胞培养准备 C.elegans 胚胎的方法

 
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酶消化和手动分离:为细胞培养准备 C.elegans 胚胎的方法

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- 漂白成年蠕虫分离开始确保程序的每一步无菌进行以避免培养细胞受到污染。 将颗粒悬浮在辣椒酶,奇蒂纳酶一种分解甲壳素结构成分种大型多糖

经过适当的消化期后,轻轻离心子,细胞培养介质代替超母体以阻止消化。 然后,通过一个18口径的针头胚胎通过机械地分离出单个细胞。 接下来,过滤溶液去除分离细胞团的碎屑。 将培养中的细胞花生胶质素,这是一种通过结合细胞表面碳水化合物帮助细胞附着子上的果胶

示例协议中,我们将体外形态分化分析准备胚胎细胞

-层流工作以避免引入细菌污染时,盆栽鸡蛋毫升毫克毫升糖中补充,并将其转移到新鲜的15毫升圆锥管中。 根据新鲜度温下管子摇动1030分钟大约80%的被消化时,鸡蛋900克离心3分钟。

在小心地去除超细剂加入毫升L15介质。 鸡蛋转移到直径为六厘米盘子中然后用10毫升无菌注射器18根针头开始手动分离为了监测分离程度,将悬浮液放入新鲜培养皿,并在显微镜查看继续,直到大约 80% 细胞分离。

去除细胞团,未消化的鸡蛋, 孵化幼虫,通过5微米过滤器轻轻过滤悬架,并通过过滤器运行45毫升L15中等,恢复细胞。为了离心过滤液900克培养细胞3分钟,将细胞重新悬浮在完整的L15介质中。口井板1毫升,并在环境空气中将盘子存放20摄氏度的潮湿密封

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空值,问题,
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