Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- C. elegans bewegt sich auf seiner Seite, indem es sinusförmige Wellen entlang seines Körpers erzeugt. Das Tier bewegt sich in eine Vorwärtsrichtung, wenn die Wellen vom Kopf zum Schwanz propagiert werden. Umgekehrt, wenn die sinusförmigen Wellen vom Schwanz zum Kopf propagiert werden, bewegt sich der Wurm rückwärts.
Rückwärtsbewegung, bekannt als Umkehrungen, ist kurz und tritt entweder spontan auf oder wird durch einen sensorischen Reiz ausgelöst, z.B. durch eine sanfte Berührung an der Vorderseite des Wurms. Um den vorderen Touch-Gewöhnungstest durchzuführen, isolieren Sie zuvor synchronisierte Würmer der gewünschten Entwicklungsstufe auf ungesättigten NGM-Platten.
Mit einem sterilisierten feinen Haar, führen Sie eine sanfte Berührung auf den vorderen Teil des Körpers. Dies wird eine Fluchtreaktion entlocken, wenn der Wurm eine Umkehrung durchführt. Lassen Sie ein 10-Sekunden-Interstimulus-Intervall für den Wurm zu erholen und die Berührung zu wiederholen. Um die Gewöhnung zu bewerten, die eine Form des nicht-assoziativen Lernens ist, notieren Sie die Anzahl der Berührungen, bis eine Umkehrung nicht mehr beobachtet wird.
Im Beispielprotokoll werden wir eine Demonstration des vorderen Touch-Gewöhnungs-Assays sehen.
- Zuerst verwendung von feuersterilen 30-Spur-Platindraht-Pick, um etwa 10 synchronisierte junge erwachsene Würmer auf neue ungesättigte NGM-Platten zu übertragen. Lassen Sie die Würmer für fünf Minuten ungestört, um ihnen Zeit zu geben, sich an die neue Platte zu akklimatisieren. Dann sterilisieren Sie ein Augenbrauenhaar, das am Ende eines Hölzers oder Zahnstochers befestigt ist, indem Sie 70% Ethanol eintauchen.
Wischen Sie mit einem sauberen, fusselfreien Gewebe und warten Sie eine Minute, bis das Ethanol verdunstet. Berühren Sie den Wurm vorsichtig auf dem Kopf mit dem Augenbrauenhaar. Wiederholen Sie die Berührungen, die 10 Sekunden zwischen den Berührungen ermöglichen, damit sich der Wurm erholen kann.
Fahren Sie mit dem Berühren fort und lassen Sie 10-Sekunden-Interstimulus-Intervalle zu, bis sich der Wurm nicht mehr rückwärts bewegt.
- Ein 10-Sekunden-Intervall zwischen berührungen ist wichtig, da dies die Erholungszeit der Tiere ermöglicht und hilft, konsistente Gewöhnungsverhaltenstests zu erhalten.
