C. elegans Ensayo de chemotaxis: un método para probar la quemosensación en gusanos

- Para dar sentido a las condiciones encontradas y responder a ellas en consecuencia, el gusano C. elegans tiene, entre otros, un sistema quimiosensorial altamente desarrollado capaz de detectar una amplia variedad de diferentes productos químicos.

Las neuronas sensoriales en la cabeza, las neuronas labiales amphid e internas, así como las neuronas en la cola, las neuronas phasmid, se exponen directa o indirectamente a través de la cutícula a las condiciones externas.

Para probar la respuesta química a olores volátiles o señales gustativas solubles en agua, aislar los gusanos de la etapa de desarrollo deseada y exponerlos al químico de prueba en un estadio experimental previamente preparado.

Al revés, cuando se expone a sustancias químicas menos favorables o tóxicas como los metales pesados, el gusano muestra químicos negativos, evitando el químico.

En el protocolo de ejemplo, veremos una demostración de un ensayo de química, probando la aversión del gusano al cobre.

- Después de la incubación nocturna, retire las placas de la incubadora y utilizando la parte inferior marcada de la placa como guía, pipetear 100 microlitros de cobre 0,5 molar recién preparado dos soluciones de sulfato en el borde del agar para crear una barrera exterior de cobre. Pipette 25 microlitros de la solución de dos sulfato de cobre para crear una barrera de línea media.

Asegúrese de que la solución de sulfato dos de cobre no entre en contacto con el parche bacteriano y permita que la solución de cobre se seque en la placa.

Inmediatamente antes del ensayo, transfiera los organismos experimentales a una placa de agar libre de bacterias y permita que los nematodos se muevan libremente durante un minuto para eliminar el exceso de bacterias.

A continuación, pipeta de 1 mililitro de M9 en el plato con adultos jóvenes que fueron transferidos 24 horas antes con el fin de lavar gusanos en un tubo de microcentrífuga. Centrifuga los nematodos a 3.000 veces g durante un minuto.

Los gusanos deben formar un pellet en la parte inferior del tubo.

Si el exceso de bacterias se transfirió inicialmente con los gusanos, repita durante un total de cinco veces. Después del lavado final, aspirar el sobrenadante hasta que quede 100 microlitros de solución M9 y el pellet de gusano.

Pipeta 20 microlitros del pellet de gusano desde la parte inferior del tubo hasta la mitad libre de bacterias de la placa de ensayo.

Retire el exceso de solución M9 de los nematodos con un tejido de laboratorio en un minuto. Asegúrese de que la solución M9 no entre en contacto con la solución de sulfato dos de cobre, y que los gusanos y la superficie del agar permanezcan intactos.

Una vez que se haya eliminado la solución M9 y todos los gusanos hayan comenzado patrones locomotores no líquidos, es decir, cuando hayan dejado de golpear, inicie el cronómetro de ensayo. Si se incluyeron accidentalmente gusanos adicionales, retírelos recogiendo aceite de halocarbono para asegurarse de que no se agregue ninguna bacteria a la placa.

Compruebe las placas de ensayo cada 30 minutos. Para las placas de ensayo con parches bacterianos, puntúe positivamente los organismos si alcanzan el parche de alimentos durante un período de cuatro horas.