Электротаксис Анализ: Метод наблюдения за движением в C. elegans

- Без сенсорных стимулов, C. elegans движение, как правило, вперед и прерывается разворотов и поворотов - случайные маневры переориентации, которые приводят к изменению направления. C. elegans являются электрорецептивными. То есть, они могут чувствовать электрические поля. При воздействии мягкого прямого тока или DC, черви двигаться по прямой непрерывный путь в направлении отрицательного электрода или катеха.

Чтобы более точно наблюдать за передвижением червя, поместите животное в микрофлюидное устройство и примените электрическое поле DC. Обратный направление поля, и червь повернет в противоположную сторону - в направлении катода. Применить переменный ток, переменного тока, переменного тока, и червь остановится.

В следующем примере протокола мы увидим установку, демонстрируя анализ электротаксиса в микрофлюидных устройствах.

- Начните этот шаг с размещения только что собранного микрокана на кси-подвижную сцену микроскопа с установленной камерой, подключенной к монитору.

Подтвердив, что сопротивление микроканла составляет около 0,6 мега-омов, прикрепите выходную трубку микроканла к одноразовому шприцу. Затем погрузите рот входной трубки в раствор нематод, подвешенный в физиологическом буфере M9. Нанесите отрицательное давление внутри шприца, чтобы аспирировать жидкость в канал.

Когда вход и розетки трубки заполнены, отключить шприц и гидростатически манипулировать потоком, регулируя относительную высоту трубки, чтобы поместить червя в центре канала. Затем заложить обе трубы плоские на той же высоте. Для поддержания нулевого потока внутри микро-канала при переключении образцов червя во время эксперимента электротаксиса, после выравнивания как входные трубки на той же высоте, если есть еще поток сделать небольшую регулировку.

- Если мы когда-либо не уверены в том, поток действительно равна нулю, мы можем вызвать разворот в движении червя, изменив полярность электрического поля, а затем оценить линейную скорость червя, как он поворачивается.

- Теперь установите источник питания до соответствующего напряжения. Активируйте электрический сигнал и позвольте одной минуте предварительного воздействия для червя акклиматизироваться к полю, в течение которого червь должен начать движение к катоду.

Когда эксперимент будет закончен, удалите всю жидкость и червей из канала. Промыть камеру с деионизированной водой и оставить устройство на горячей пластине при 125 градусов по Цельсию, чтобы высохнуть.