Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Uten sensoriske stimuli er C. elegans bevegelse generelt fremover og avbrytes av reverseringer og svinger - tilfeldige reorienterende manøvrer som resulterer i en retningsendring. C. elegans er elektroreceptive. Det vilt kan de føle elektriske felt. Når de utsettes for en mild likestrøm eller LIKE, beveger ormer seg i en rett uavbrutt bane i retning av den negative elektroden eller katoden, en oppførsel som kalles elektrotaxis.
For mer nøyaktig å observere ormens bevegelse, plasser dyret i en mikrofluidisk enhet og bruk et DC elektrisk felt. Snu retningen på feltet, og ormen vil dreie motsatt vei - mot katodens retning. Påfør en vekselstrøm, AC, og ormen vil stoppe. Den vekslende endringen i feltets retning overvelder ormens nevromotoriske systemer, noe som resulterer i ormens immobilisering.
I følgende eksempelprotokoll vil vi se et oppsett som demonstrerer en elektrotaxisanalyse i en mikrofluidisk enhet.
- Begynn dette trinnet ved å plassere den nettopp monterte mikrokanalen på et bevegelig trinn i et mikroskop med et montert kamera koblet til en skjerm. Koble strømforsyningen til mikrokanalens elektroder.
Etter å ha bekreftet at mikrokanalens motstand er rundt 0,6 mega-ohmer, fest mikrokanalens utgangsrør til en engangssprøyte. Senk deretter munnen på innløpsrøret til en løsning av nematoder suspendert i M9 fysiologisk buffer. Påfør negativt trykk inne i sprøyten for å aspirere væske inn i kanalen.
Når både innløps- og utløpsrørene er fylt, koble fra sprøyten og hydrostatisk manipulere strømmen ved å justere rørets relative høyde for å plassere en orm i midten av kanalen. Legg deretter begge rørene flatt i samme høyde. For å opprettholde nullstrøm inne i mikrokanalen når du bytter ormprøver under et elektrotaksi-eksperiment, etter å ha utjevnet begge innløpsrørene til samme høyde, hvis det fortsatt er strømning, gjør små justeringer på rørets høyde i forhold til hverandre.
- Hvis vi noen gang er usikre på om strømmen virkelig er null, kan vi indusere en reversering i ormens bevegelse ved å endre polariteten til det elektriske feltet og deretter evaluere ormens lineære hastighet når den snur seg.
- Sett nå strømforsyningen på riktig spenning. Aktiver det elektriske signalet, og la det være ett minutts preeksponering for ormen å akklimatisere seg til feltet, i løpet av hvilken tid ormen skal begynne å bevege seg mot katoden. Når minuttet er gått, begynn å registrere.
Når eksperimentet er ferdig, fjern all væske og ormer fra kanalen. Skyll kammeret med avionisert vann og la enheten stå på en kokeplate ved 125 grader Celsius for å tørke.
