Elektrotaxis Assay: En metode til at observere bevægelse i C. elegans

- Uden sensoriske stimuli, C. elegans bevægelse er generelt fremad og afbrydes af vendinger og drejninger - tilfældige omlægning manøvrer, der resulterer i en ændring af retning. C. elegans er elektroreceptive. Det vil sige, de kan fornemme elektriske felter. Når de udsættes for en mild jævnstrøm eller DC, orme bevæger sig i en lige uafbrudt sti i retning af den negative elektrode eller katode, en adfærd præget elektrotaxis.

For mere præcist at observere ormens bevægelse, skal du placere dyret i en mikrofluidisk enhed og anvende et DC elektrisk felt. Vend retningen af feltet, og ormen vil vende den modsatte vej - mod retningen af katoden.

I følgende eksempelprotokol vil vi se en opsætning, der demonstrerer en elektrotaxisanalyse i en mikrofluidisk enhed.

- Begynd dette trin ved at placere den netop samlede mikrokanal på et xy-bevægeligt trin i et mikroskop med et monteret kamera tilsluttet en skærm.

Efter at have bekræftet, at mikrokanalens modstand er omkring 0,6 mega-ohms, fastgør mikrokanalens udgangsrør til en engangssprøjte. Derefter nedsænkes indløbsrørets mund i en opløsning af nematoder suspenderet i M9 fysiologisk buffer. Påfør undertryk inde i sprøjten for at suge væske ind i kanalen.

Når indløbs- og udløbsrørene begge er fyldt, frakoble sprøjten og hydro-statisk manipulere strømmen ved at justere rørets relative højde til at placere en orm i midten af kanalen. Derefter lå begge rør fladt i samme højde. For at opretholde nul flow inde i mikro-kanal, når du skifter orm prøver under en elektrotaxis eksperiment, efter nivellering både indløbsrør til samme højde, hvis der stadig er flow foretage små justeringer af rørets højde i forhold til hinanden.

- Hvis vi nogensinde er usikre på, om strømmen virkelig er nul, kan vi fremkalde en vending i ormens bevægelse ved at ændre polariteten i det elektriske felt og derefter evaluere ormens lineære hastighed, når den vender rundt.

- Sæt nu strømforsyningen til den relevante spænding. Aktiver det elektriske signal, og lad et minuts foreksponering for ormen akklimatisere sig til marken, i hvilket tidsrum ormen skal begynde at bevæge sig mod katoden. Når minuttet er gået, skal du begynde at optage.

Når eksperimentet er færdigt, skal du fjerne al væske og orme fra kanalen. Skyl kammeret med de-ioniseret vand og lad enheden på en kogeplade ved 125 grader Celsius tørre.