Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- כדי להעריך את הקטרים ב- C. elegans, השתמש במצלמה כדי לתעד את תנועת התולעים על צלחת אגר, להבטיח אפילו הארה של הצלחת במהלך ההקלטה.
הנח מספר טבעות נחושת על צלחת אחת כדי לעקוב בו זמנית אחר תולעים בכל טבעת.
בפרוטוקול הדוגמה, נראה הדגמה של בדיקה עוקבת תנועה בדיקת ההשפעות של אלכוהול על מהירות התנועה של התולעת.
- כדי להתחיל, לקחת שתי דקות או פחות כדי להעביר 10 תולעים מכל קבוצת ניסוי למרכז טבעת נחושת על צלחת התאקלמות. זוהי צלחת ללא אתנול. הימנע מהעברת מזון עם התולעים כפי שהוא יפחית את תנועתם.
תן לכל צלחת התאקלמות לדגור בטמפרטורת החדר במשך 30 דקות. לאחר מכן, להעביר את התולעים לצלחת ההסמכה, בעקבות הסדר המשמש להנחיית התולעים על צלחת ההתאקלמות.
- המהירות שבה בעלי החיים מועברים בשלב זה חשובה מאוד, מכיוון שבעלי החיים המועברים ייחשפו לאתנול זמן רב יותר.
- מיקרוסקופ עם מצלמת וידאו ברזולוציה גבוהה נדרש כדי לצלם את התולעים עכשיו. אפילו תאורה, כגון מתוך תאורה אחורית מרובעת 3 אינץ ', הוא חיוני לניתוח.
הכן את תוכנת ניתוח התמונה ללכידת 120 סרטים עם מסגרת, 12 סיביות, גווני אפור, זמן לשגות במסגרת אחת לשניה. כדי להקטין את גודל קובץ הפלט, תוך שמירה על רזולוציית תמונה מספקת, השתמש במצב איתור של שניים על שניים.
עכשיו להקליט שתי דקות סרטים מכל צלחת, 10 דקות לאחר התולעים האחרונות הונחו על הצלחת.
תחילה החל מסנן על התמונות שמשטחות את הרקע ומשפרות את החדות של אובייקטי התולעת.
כעת, נתח את תנועת בעלי החיים בכל טבעת בנפרד עם אזור מעניין מעגלי החופף לטבעת הנחושת.
בחלון טבלת נתוני מעקב, השתמש בלחצן אפשרויות מעקב כדי לאפשר אי הכללה של רצועות ספציפיות ולהגבלת כל הממצאים הניסיוניים.
הגדר את אורך המסלול הכולל המינימלי ל- 400 מיקרון והגדר את סוג התנועה השולט כאוטי. לאחר מכן, תחת הפרמטר Track, הגדר את האובייקטים כך שיאפשרו לרצועות חלקיות אורך מינימלי של 21 מסגרות ושיהיה להם עומק הקרנת מעקב של מסגרת אחת.
כעת, כדי ליזום את תהליך המעקב, לחץ תחילה על לחצן חפש את כל הרצועות באופן אוטומטי. פעולה זו מציגה את תיבת הדו-שיח אפשרויות ספירה/גודל ואת תיבת הדו-שיח מעקב.
כעת החל מסנן גודל כדי לא לכלול אובייקטים הגדולים או קטנים יותר מתולעת אחת. עבור לתפריט מדידה ולאחר מכן בחר בתפריט משנה מדידה.
כעת, השלם את תהליך המעקב על-ידי לחיצה על המשך בתיבת הדו-שיח מעקב.
לאחר מכן, חשב את המהירות של כל תולעת על-ידי חישוב הממוצע של המרחק בין כל מסגרת או כל שנייה וצור מהירות ממוצעת עבור המסלולים בכל אוכלוסייה.
