Encyclopedia of Experiments: Biology
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- C. elegans의 운동을 평가하기 위해 카메라를 사용하여 한천 판에 웜의 움직임을 기록하여 녹음 중에 접시의 조명을 확인합니다.
여러 구리 고리를 한 접시에 배치하여 각 링의 벌레를 동시에 추적할 수 있습니다.
예제 프로토콜에서는 벌레의 운동 속도에 알코올의 영향을 테스트하는 운동 추적 분석의 데모를 볼 수 있습니다.
- 시작하려면 각 실험 그룹에서 10 개의 웜을 적응 판의 구리 고리 중심으로 옮기려면 2 분 이내에 걸릴 수 있습니다. 이것은 에탄올이 없는 접시입니다. 웜이 움직임을 감소시키기 때문에 벌레와 함께 음식을 옮기는 것을 피하십시오. 또한 벌레가 잠복하기 때문에 한천 표면을 손상시키지 마십시오.
각 적응판이 30분 동안 실온에서 배양하게 하십시오.
- 이 단계에서 동물이 옮겨지는 속도는 옮겨진 동물이 에탄올에 더 오래 노출되기 때문에 매우 중요합니다.
- 고해상도 비디오 카메라가 있는 현미경은 지금 웜을 촬영해야 합니다. 3인치 제곱 백라이트와 같은 조명도 분석에 필수적입니다.
이미지 분석 소프트웨어를 준비하여 초당 120프레임, 12비트, 그레이스케일, 타임랩스 영화를 한 프레임으로 캡처합니다.
이제 각 플레이트에서 2분 짜리 영화를 기록하고, 마지막 벌레가 해당 플레이트에 배치된 지 10분 후에 두 번째 2분 짜리 기록을 세울 수 있습니다.
먼저 배경을 평평하게 하고 웜 개체의 대비를 향상시키는 이미지에 필터를 적용합니다. 메뉴에서 프로세스를 선택한 다음 필터를 선택한 다음 강화한 다음 병합합니다.
이제 구리 고리를 겹치는 원형 영역과 각 링의 동물의 움직임을 별도로 분석합니다.
추적 데이터 테이블 창에서 추적 옵션 버튼을 사용하여 특정 트랙을 배제하고 실험 아티팩트를 제한합니다. 자동 추적 탭에서 트랙 매개 변수를 프레임당 400미크론의 속도 제한으로 설정합니다.
최소 총 트랙 길이를 400미크론으로 설정하고 우세 모션 유형을 혼돈으로 설정한 다음 트랙 매개 변수 에서 오브젝트를 설정하여 부분 트랙의 최소 길이가 21프레임이고 한 프레임의 추적 프로젝션 깊이를 갖도록 합니다.
이제 추적 프로세스를 시작하려면 먼저 모든 트랙 찾기 자동 함수 버튼을 클릭합니다.
이제 크기 필터를 적용하여 단일 웜보다 크거나 작은 객체를 제외합니다. 측정 메뉴로 이동한 다음 측정 하위 메뉴를 선택합니다.
이제 추적 대화 상자에서 계속을 클릭하여 추적 프로세스를 완료합니다.
다음으로 각 프레임 또는 초마다 이동한 거리를 평균화하여 각 웜의 속도를 계산하고 각 모집단의 트랙에 대한 평균 속도를 생성합니다.
