C. elegans Rörelsespårning: En metod för att bedöma rörelse i maskar

- För att bedöma rörelse i C. elegans, använd en kamera för att spela in maskarnas rörelse på en agarplatta, vilket säkerställer jämn belysning av plattan under inspelningen.

Placera flera kopparringar på en platta för att samtidigt spåra maskar i varje ring.

I exempelprotokollet kommer vi att se en demonstration av en rörelsespårningsanalys som testar alkoholens effekter på maskens rörelsehastighet.

- Till att börja med, ta två minuter eller mindre för att överföra 10 maskar från varje experimentell grupp till mitten av en kopparring på en acklimatiseringsplatta. Detta är en tallrik utan etanol. Undvik att överföra mat med maskarna eftersom det kommer att minska deras rörelse. Undvik också att skada agarytan eftersom maskarna kommer att gräva.

Låt varje acklimatiseringsplatta inkubera vid rumstemperatur i 30 minuter. Överför sedan maskarna till analysplattan, enligt den ordning som används för att placera maskarna på acklimatiseringsplattan.

- Den hastighet med vilken djuren överförs i detta steg är mycket viktig, eftersom de överförda djuren kommer att utsättas för etanol längre.

- Ett mikroskop med högupplöst videokamera krävs för att filma maskarna nu. Även belysning, till exempel från en tre tums fyrkantig bakgrundsbelysning, är avgörande för analysen.

Förbered bildanalysprogramvaran för att fånga 120-bildrutor, 12-bitars filmer i gråskala och timelapse-filmer i en bildruta per sekund.

Spela nu in tvåminutersfilmer från varje tallrik, 10 minuter efter att de sista maskarna placerades på den plattan. Gör sedan en andra två minuters inspelning, 30 minuter efter att maskar placerades på plattan. För denna demonstration används Image-Pro Plus-programvara, eftersom en mängd andra program kan anpassas till tekniken.

Använd först ett filter på bilderna som förenklar bakgrunden och förbättrar kontrasten mellan maskobjekten.

Analysera nu djurens rörelse i varje ring separat med ett cirkulärt intresseområde som överlappar kopparringen.

I fönstret Spårningsdatatabell använder du knappen Spårningsalternativ för att tillåta att specifika spår utesluts och för att begränsa eventuella experimentella artefakter. Under fliken Automatisk spårning ställer du in spårparametrarna till en hastighetsgräns på 400 mikrometer per bildruta.

Ställ in minsta totala spårlängd på 400 mikron och ställ in den dominerande rörelsetypen på Kaotisk.

Om du vill initiera spårningsprocessen klickar du först på funktionsknappen Sök alla spår automatiskt.

Använd nu ett storleksfilter för att utesluta objekt som är större eller mindre än en enda mask. Gå till menyn Mått och välj sedan Måttundermeny.

Slutför nu spårningsprocessen genom att klicka på Fortsätt i spårningsdialogrutan. Dubbelkolla att utdataspåren med filmmaterialet.

Beräkna sedan hastigheten för varje mask genom att beräkna det tillryggalagda avståndet mellan varje bildruta eller varje sekund och skapa en genomsnittlig hastighet för spåren i varje population.