Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- מקום תולעת מהונדסת אחת המבטאת GCaMP - חלבון חישת סידן - בתא הדמיה יחד עם מזון חיידקי לתולעת.
תולעים מהונדסות מבטאות חלבון חיישן GCaMP תחת שליטה של מקדם המניע ביטוי GCaMP בנוירון מסוים. כאשר נוירון זה מופעל, הוא יורה פוטנציאל פעולה, אשר depolarizes קרום הפלזמה.
GCaMP בנוירון הנרגש קושר את יוני הסידן. זה גורם ל- GCaMP פלואורסצנטי כאשר התולעים מצולמות באור עירור פלואורסצנטי בעוצמה נמוכה. בפרוטוקול לדוגמה, נשתמש בהדמיית סידן כדי לדמיין את פעילות האינטרנורון של AVA במיקרו-שאמברים מהונדסים C. elegans במיקרו-שאמברים אגרוז.
- הדמיית סידן מבוצעת על מיקרוסקופ מורכב המצויד באפיפלואורסצנטיות שדה רחב.
הפעל סרט פרץ במשך 24 שעות שמצלם כל תולעת כל 15 עד 30 דקות. ראשית, הקלט 20 שניות עם DIC, לאחר מכן 20 שניות עם פלואורסצנטיות GFP, ולבסוף, תמונה של אות mKate2 עבור רמות ביטוי שליטה.
לבדיקת נתונים חזותיים, השתמש במפת צבעים כוזבת כדי לשפר את הניראות של שינויים קטנים בעוצמת הפלואורסצנטיות.
