Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- ضع دودة معدلة وراثيا واحدة تعبر عن GCaMP - وهو بروتين استشعار الكالسيوم - في غرفة تصوير إلى جانب الطعام البكتيري للدودة.
الديدان المعدلة وراثيا التعبير عن بروتين استشعار GCaMP تحت سيطرة المروج الذي يدفع التعبير GCaMP في خلية عصبية محددة. عندما يتم تنشيط تلك الخلايا العصبية, فإنه يطلق إمكانات العمل, الذي ينقش غشاء البلازما.
GCaMP في الخلايا العصبية متحمس يربط أيونات الكالسيوم. وهذا يسبب GCaMP إلى الفلورس عندما يتم تصوير الديدان مع ضوء الإثارة الفلورية منخفضة الكثافة.
- يتم إجراء تصوير الكالسيوم على مجهر مركب مجهز ل epifluorescence مجال واسع. للحد من التعرض للضوء، واستخدام إشارة منطق الترانزستور الترانزستور الذي يؤدي إلى LED لإلقاء الضوء على العينة في نفس الوقت الكاميرا يسجل الإطار.
تشغيل فيلم انفجار لمدة 24 ساعة أن الصور كل دودة كل 15 إلى 30 دقيقة. أولا، سجل 20 ثانية مع DIC، ثم 20 ثانية مع مضان GFP، وأخيرا، صورة للإشارة mKate2 لمستويات التعبير التحكم.
لفحص البيانات البصرية، استخدم خريطة ملونة خاطئة لتعزيز رؤية التغيرات الصغيرة في كثافة الفلورسينس.
