カルシウムイメージング:生きたC.エレガンスにおける神経活動を可視化する方法

- GCaMP(カルシウムセンシングタンパク質)を発現するトランスジェニックワームを、ワーム用の細菌性食品と一緒にイメージングチャンバーに入れ、蓋と実験室フィルムで皿を密封して蒸発を防ぎます。

トランスジェニックワームは、特定のニューロンでGCaMP発現を駆動するプロモーターの制御下でGCaMPセンサータンパク質を発現する。そのニューロンが活性化されると、原形質膜を脱分極する作用電位を発する。

興奮したニューロンのGCaMPはカルシウムイオンに結合します。これはワームが低強度蛍光励起光で画像化されたときにGCaMPが蛍光を発する原因となります。

- カルシウムイメージングは、広視野蛍光に備えた複合顕微鏡で行われます。光の露出を制限するには、カメラがフレームを記録すると同時に、LEDをトリガーするトランジスタトランジスタロジック信号を使用します。

15~30分ごとに各ワームを撮影するバーストムービーを24時間実行します。まずDICで20秒、次にGFP蛍光で20秒、そして最後に制御表現レベルのmKate2信号の画像を記録します。

目視データ検査では、蛍光強度の小さな変化の可視性を高めるために偽色マップを使用してください。